第二章工业发酵菌种选育PPT.pptVIP

操作步骤 1．单孢子悬液制备 取斜面，加入6ml 0.1mol／L pH6.o的磷酸缓冲液，用接种环刮下孢子，振荡试管，立即通过带滤纸漏斗过滤，由此制得单孢子悬液，若孢子液浑浊状，其孢子浓度可达l06个／ml，此为待处理孢子悬液。 2．MNNG溶液的制备 用分析天平称取2mg，加入2ml 0.1mol／L pH 6.0磷酸缓冲液，于暗处振荡溶解。 3．诱变处理 吸取MNNG溶液lml，加入到1m1孢子悬液中，30℃振荡30min，立即稀释1000倍停止作用，然后以10-2，10-4两个稀释度分离培养，30℃ 3天后计数。 4．死亡率计算 将未处理的孢子液1ml加入1ml磷酸缓冲液中，同上逐级稀释分离， 30℃下培养3天。根据处理前后的活孢子数可计算出死亡率。 5．挑取菌落进行糖化酶及蛋白酶产量筛选． 五、代谢控制育种 改变代谢通路育种 改变自我代谢调节系统育种 六、基因育种 基因重组育种：是运用体外DNA各种操作或修改手法获得目的基因，再借助于病毒、细菌质粒或其他载体，将目的基因转移至新的宿主细胞并使其在新的宿主细胞系统内进行复制和表达，或者通过细胞间的相互作用，使一个细胞的优秀性状经其间遗传物质的交换而转移给另—个细胞的方法。 基因重组 １、获得待克隆的DNA片段（基因）； ２、目的基因与载体在体外连接； ３、重组DNA分子导入宿主细胞； ４、筛选、鉴定阳性重组子； ５、重组子的扩增与／或表达。 五、防止菌株衰退的措施 菌种退化：菌种的发酵能力降低、繁殖能力降低、发酵产品的得率降低 1、衰退的可能原因 （1）、菌种保藏不妥 （2）、菌种的生长要求没得到满足 2、防止菌种衰退的方法 A、从菌种选育方面考虑 B、尽量减少传代次数（减小突变） C、创造良好的培养条件 D、利用不易衰退的细胞传代 E、采用有效的菌种保藏方法 第二章　工业发酵菌种选育 一、微生物工业对菌种的要求 微生物资源丰富，广布于土壤、水和空气等自然界中，其中土壤中最多。现在微生物工业用菌有的是野生型，有的是通过诱变得到的突变体。 发展趋势：　从野生型 　　 变异株 自然选育 　代谢控制育种 诱变育种 　基因工程定向育种 第一节 工业发酵生产菌种 （1）所需培养基易得，价格低廉； （2）培养和发酵条件温和（糖浓度、温度、pH、溶解氧、渗透压等） （3）生长速度和反应速度较快，发酵周期短 （4）单产高 （选择野生型、营养缺陷型或调节突变株） （5）抗病毒能力强 （6）菌种纯粹，不易变异退化，稳定性好 （7）菌体不是病源菌，不产生任何有害的生物活性物质和毒素（包括抗生素、激素和毒素），保证安全 微生物工业对大规模生产用菌的要求原则： 二、工业发酵微生物及其代谢产物 ?什么是初级代谢？什么是次级代谢？P12 ?什么是初级代谢产物？什么是次级代谢产物？ 初级代谢产物是指微生物产生的，生长和繁殖所必需的物质，如蛋白质、核酸等。 次级代谢产物是指由微生物产生的，与微生物生长、繁殖无关的一类物质。 抗生素、色素、毒素等是与初级代谢产物(如氨基酸、核酸)相对产生的次级代谢产物。 1、微生物代谢产物的类型 2、微生物次级代谢与初级代谢的关系 许多抗生素的基本结构是由少数几种初级代谢产物构成的，所以次级代谢产物是以初级代谢产物为母体衍生出来的，次级代谢途径并不是独立的，而是与初级代谢途径有密切关系的。 糖代谢中间体，既可用来合成初级代谢产物，又可用来合成次级代谢产物，这种中间体叫做分支中间体。 微生物次级代谢，其目的产物的生物合成途径取决于微生物的培养条件和菌种的特异性。 什么叫分叉中间体？ 问题 次生代谢产物主要在哪个时期合成？次生代谢产物生成与初生代谢产物有关吗？ 三、工业上常用的微生物 微生物在工业上的用途很广，包括化工、医药、食品、水产、国防、纺织、石油勘探及石油化工等方面。 微生物的代谢产物多，已超过1300多种，而用于大规模工业生产的不足100多种；微生物酶有近千种，而工业上用的不过40－50种。微生物具有巨大的潜力可挖掘。 工业上常用菌种：细菌、放线菌、酵母菌、霉菌 2、酵母菌 种类：酒精酵母、啤酒酵母、假丝酵母 红酵母、面包酵母、毕赤氏酵母 应用：生产酒精、啤酒、石油发酵脱蜡和制取蛋白质、生产脂肪 面包酵母 啤酒酵母 红酵母 3、霉菌 曲霉属 应用：生产有机酸、生产淀粉酶、果胶酶、葡萄糖氧化酶 应用：酱油、酱类（淀粉酶） 米曲霉 应用：产糖化酶和蛋白酶、主要用于酿酒制曲和酱油制曲 应用：生产甲义丁