高速逆流色谱与微波辅助萃取分离化侧柏中的黄酮类化合物毕业论文.docVIP

赣 南 医 学 院 2007届毕业生论文 高速逆流色谱与微波辅助萃取分离纯化 侧柏中的黄酮类化合物 学校名称： 赣西医学院 学生姓名： 专 业： 药学 学 号： 班 级： 03药学本科班 完成日期： 高速逆流色谱与微波辅助萃取分离纯化侧柏中的黄酮类化合物 摘要 首次采用高速逆流色谱仪TBE2300A与微波辅助萃取对侧柏药材中的活性黄酮类化合物进行分离纯化。实验过程中：微波辅助萃取，温度80℃，时间29min，功率800W;高速逆流色谱提取，对溶剂系统和参数条件进行系统的优化,获得较好的分离条件,溶剂系统:正丁醇-乙酸乙酯-正己烷-水(6∶1∶1∶12 ,V / V ) ,上相(有机相) 为固定相,下相(水相) 为流动相,反相洗脱；进样浓度:20mg/ mL ；进样体积:20mL ；流速:3.0mL/ min ；转速:850 r/ min 。进一步分离获得四种高纯度黄酮类化合物,经薄层色谱鉴定,分别为A类黄酮、B类黄酮、C类黄酮、D类黄酮，但其具体结构尚待确定。 关键词 高速逆流色谱 微波萃取 　侧柏叶　黄酮类化合物 1 引言 侧柏叶为柏科(Cupressaceae) 植物侧柏Biota orientalis (L .) Endl . 的干燥嫩枝叶,侧柏别名扁柏、香柏、片柏、片松。常绿乔木,多为栽培,除青海、新疆外全国均有分布,味苦涩、微辛。具有凉血止血、清肺止咳功效,在临床上常用于治疗出血症、风湿痹痛、高血压、咳喘等。 目前对侧柏叶的研究主要是关于其挥发油研究和总黄酮的研究，部分是关于其提取工艺的研究探索。其中对侧柏叶黄酮化合物研究有:炮制研究、质量标准研究、化学成分研究（挥发油、黄酮、鞣质、无机元素）、药理研究（止血作用、抗炎作用、抗肿瘤活性、）、临床研究。目前文献报道侧柏叶的主要成分是黄酮类化合物, 而且主要针对黄酮类化合物的含量测定,从其中提出的单体化合物只有对槲皮素和槲皮苷的报道。而黄酮类化合物成分甚多,不能只局限于槲皮素和槲皮苷, 故对侧柏叶中黄酮类成分的研究有待进一步深入。 另外，对侧柏叶提取分离方法的主要文献报道有：微波辅助萃取法、超临界流体萃取(SFE)、索氏提取法、热回流法、冷浸法、超声波法、水蒸汽蒸馏法、渗漉法、加压逆流提取法、旋流提取法、水提法、固相微萃取法、高压液相法、高速逆流色谱法、柱色谱法、重结晶法等。其中都是单独用到了微波辅助萃取法或高速逆流色谱法，未见关于两者联用提取分离侧柏叶黄酮化合物的报道。 高速逆流色谱(high-speedc ounter-currentch romatography,HSCCC)是一种基于液-液多级逆流萃取建立的色谱体系，以轻巧的聚四氟乙烯螺旋管作分离柱，在行星式运动中连续地完成整个分配、传递、分离过程。无固相载体，避免了待分离样品与固相载体表面产生化学反应而变不可逆吸附；分辨率高，可制备纯品；可采用正向或反向的连续洗脱、步级洗脱、梯度洗脱等方式；可采用多种多样的溶剂系统实现物质的对流分配；能在一个流程中分离复杂样品中极性差异极大的各个组分，特别是能有效地分离强极性的组分；仪器及试剂成本明显低于高效液相色谱(highperformance liquid chromatography,HPLC),适用于制备高纯度、高附加值的化合物。近20年来HSCCC在生物化学、医药学、农业、环境、材料、化工、海洋生物等众多领域成功应用。因HSCCC可采用不同物化特性的溶剂体系和多样性的操作条件，具有较强的适应性，为从复杂的天然产物粗制品中提取不同特性(如不同极性)的有效成分提供了有利条件，因此在80年代后期，在世界范围内的“回归大自然”浪潮的席卷下，HSCCC被大量用于天然产物化学成分的分析和制备分离。将 HS CC C用于天然产物分离，一方面可以在高类别天然药物新药的研发中，逐级分离制备活性部位或活性成分，配合活性跟踪与人药部位的设计；另一方面可以配合高类别中药新药申报工作，制备必需的高纯度指标成分和必需控制的杂质成分。本文探索了丹参脂溶性成分和雪莲黄酮的HSCCC分离条件。 高速逆流色谱法分离的优点：首先,它不用固态支撑体,不存在样品组分的吸附、变性、失活、拖尾等现象,节省了材料和溶媒消耗；其次,它操作简便,重现性好,分离量较大,分离效率高,分离时间短,一般几个小时即可完成一次分离；此外,有广泛的液一液分配体系可供选择,体系更换方便、快捷；它的进样量大,这对于样品的纯化制备显示出很大的优势。 微波萃取( Micrwave Extraction, M ) 是产生在分析化学研究的基础上的， 是制