磷脂化学及提取.docVIP

磷脂化学与提取 一、磷脂的组成与结构 磷脂可分为两类：鞘磷脂（神经磷脂）和甘油醇磷脂 鞘磷脂也称神经磷脂，它是神经酰胺与磷酸直接相连，然后再与胆碱或胆胺相连而成的脂。甘油醇磷脂是由甘油与磷酸反应生成的脂。 磷脂典型的化学结构式为： 甘油磷脂 甘油醇磷脂主要有以下几种： 卵磷脂（磷脂酰胆碱，phosphatidylcholines，PC） 脑磷脂（磷脂酰乙醇胺，phosphatidylethanolamines，PE） 肌醇磷脂(磷脂酰肌醇,phosphatidylinostols，PI) 丝氨酸磷脂(磷脂酰丝氨酸，phosphatidylserines,PS) 此外还有磷脂酰甘油、二磷脂酰甘油、缩醛磷脂和溶血磷脂等。 1、卵磷脂 卵磷脂结构式为： 卵磷脂的分子结构特点是一个脂酰基被磷酸胆碱基所取代，而磷酸胆碱所连接的碳位置不同又产生α、β两种异构体，其磷酸胆碱基连接在甘油基的第3碳位上称α-型，连接在第2碳位上则为β-型。自然界存在的卵磷脂为L-α-卵磷脂，即R2-CO基处在甘油碳链的左边为L-型。卵磷脂分子中不同碳位上所连接的脂肪酸也不同，α碳位上连接的几乎都是饱和脂肪酸，而β碳位上连接的通常为亚油酸、亚麻酸和花生四烯酸等不饱和脂肪酸。 卵磷脂广泛存在于动植物体内，在动物的脑、精液、肾上腺及细胞中含量尤多。禽类卵黄中含量最为丰富，达干物质总量的8%～10%。 2、脑磷脂 脑磷脂结构式为： 脑磷脂又称氨基乙醇磷脂，其分子结构与卵磷脂相似，只是以氨基乙醇代替了胆碱，有α、β两种异构体，与磷相连的羟基为甘油的伯醇基称α型，为甘油的仲醇基则称β型。脑磷脂水解后可得到甘油、脂肪酸、磷酸和乙醇胺。脑磷脂通常与卵磷脂共同存在于动物脑组织和神经组织中，心、肝及其它组织也有分布。脑磷脂在动物脑组织中含量最多，约占脑干物质总量的4%～6%。 3、肌醇磷脂 肌醇磷脂结构式为： 肌醇磷脂是磷脂酸与肌醇构成的磷脂，磷脂的极性基团部分有一个六碳环状糖醇（肌醇），除一磷酸肌醇磷脂外，还有1，4-二磷酸肌醇磷脂和1，4，5-三磷酸肌醇磷脂。肌醇磷脂存在于多种动植物组织中，常与脑磷脂共同存在。 4、丝氨酸磷脂 丝氨酸磷脂结构式为： 丝氨酸磷脂由磷脂酸与丝氨酸组成，其结构与前三种甘油醇磷脂相似。 5、神经醇磷脂 神经醇磷脂含N:P的比例是2：1，不含甘油基，而是神经氨基醇和脂肪酸、磷酸、胆碱的化合物。其典型代表是鞘磷脂，结构特征是，甘油醇磷脂的醇是甘油醇，而神经醇磷脂的醇是神经氨基醇，此外鞘磷脂中的脂肪酸与神经氨基醇的氨基相连接，且分子中只含有一个脂肪酸。 二、磷脂的来源与分布 磷脂在动物和植物体内广泛存在。在动物体内，磷脂主要存在于脑、肾、肝等器官内；在植物界中，磷脂主要存在于种子、坚果及谷物中。在动物性磷脂原料中，以蛋黄含量最为丰富，约含磷脂10%；在植物性磷脂原料中，以大豆含量最高，约含2%～3%。卵黄磷脂和大豆磷脂的组成成分如下：。 表 卵黄磷脂和大豆磷脂的组成成分 成分 卵黄磷酯含量(%) 大豆磷脂含量(%) 磷脂酰胆碱（PC）））））） 图1 卵磷脂的紫外吸收光谱图 （四）流动相的选择 若选用正相色谱柱，常规或梯度淋洗，其所用的流动相体系主要有以下两类：Ⅰ.甲醇-乙腈-水；Ⅱ.正己烷-异丙醇-磷酸。本实验对以上两类流动相分别进行了测试，但都未取得满意结果。经反复试验，最终选用甲醇/异丙醇/正己烷作流动相，并对其配比进行了研究，当甲醇/异丙醇/正己烷=60/35/5（V/V）时,样品中的卵磷脂得到了较好分离（图2、图3），保留时间为26.035min。 图2 标准品中卵磷脂色谱图 图3 样品中卵磷脂色谱图 （五）标准曲线的绘制 准确吸取卵磷脂标准液1.0、2.0、5.0、10.0、15.0μl分别进样，按色谱条件进行分析测定，以卵磷脂进样量为纵坐标，峰面积积分值为横坐标，绘制标准曲线，计算得回归方程为：Y=0.0017X-0.1679(r=0.9999),表明卵磷脂在2.06～30.9μg范围内呈现良好的线性关系。 （六）精密度和重复性试验 准确吸取5μl标准溶液，于上述色谱条件下重复进样5次，分析测定卵磷脂的含量，并记录保留时间，进行统计分析，结果见表1，保留时间及卵磷脂含量的RSD均在5%以下,表明本实验具有良好的重现性,色谱条件合理。 表1 标准溶液中卵磷脂测定的重复性 项目 保留时间（min） 卵磷脂含量（μg） 测定平均值 26.035 9.98 标准差 0.34 0.21 相对标准偏差（%） 1.32 2.13 （七）稳定性试验 分别精确吸取5μl卵磷脂标准液和卵磷脂样品液，于上述色谱条件下每1h进样一次，共5次，分析测定卵磷脂的含量，结果见表2，标准液与样品液中卵磷脂的含量的RSD均在5%以下，表明卵磷脂在