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2第二篇 菌种的来源 6.ppt 41页

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黄色短杆菌F9-50的诱变谱系 Bervibacterium flavum As 1.495 (leu-) lys.HCl 2.1 g/l F6-16 (leu -, Thr -) 20.8 g/l F9-50 (leu -, Thr -, AEC r) 33.5 g/l 三、基因的直接进化(directed evolution) 突变 基因突变库的建立 筛选 基因突变库的筛选 基因复制与遗传 步骤: 在分子水平上,对目标基因直接处理,然后通过高通量的筛选方法,提高目标蛋白的性能。 * 第二章:菌种的来源 微生物的特性及工业微生物的要求 一些工业化产品生产菌种的特点 自然界中有目的微生物分离的原则 菌种选育、分子育种 第一节 微生物的特性及工业微生物的要求 一、微生物的特性 有些微生物能在厌氧的条件下生长 有些微生物能够利用简单的有机物和无机物满足自身 的生长 有些微生物能进行复杂的代谢 有些微生物能利用较复杂的化合物 有些微生物能在极端的环境下生长 二:工业化菌种的要求 能够利用廉价的原料,简单的培养基,大量高效地合成 产物 有关合成产物的途径尽可能地简单,或者说菌种改造的 可操作性要强 遗传性能要相对稳定 不易感染它种微生物或噬菌体 产生菌及其产物的毒性必须考虑(在分类学上最好与致病 菌无关) 生产特性要符合工艺要求 放线菌(链霉素四环素;红霉素等) 真菌(青霉素、头孢等) 一些产芽孢的细菌 植物或动物来源 一、抗生素生产有关的微生物 抗生素是次级代谢产物,需要生物体进行复杂的代谢,目前发现的生物来源如下: 第二节 已工业化产品生产菌的介绍 二、氨基酸生产有关的微生物 代谢控制发酵:用人工诱变的方法,有意识地改变微生物的代谢途径,最大限度地积累产物,这种发酵形象地称为代谢控制发酵,最早在氨基酸发酵中得到成功应用。 50, 60年代以氨基酸发酵为代表的代谢控制发酵,是发酵工业发展历史上的一个转折点: HD:高丝氨酸脱氢酶 黄色短杆菌中赖氨酸、苏氨酸、蛋氨酸和异亮氨酸的合成调节机制 HT:高丝氨酸转乙酰酶 AK:天冬氨酸激酶 氨基酸生产菌的要求: 代谢途径比较清楚, 代谢途径比较简单 谷氨酸发酵的菌种: 其它氨基酸生产菌: 棒杆菌属,短杆菌属、节杆菌属或小 杆菌属的棒型细菌 常规菌种一般也是以谷氨酸生产菌选育而成;工程菌,大肠杆菌,枯草芽孢杆菌 三、食品酶制剂生产有关的微生物 开发一个新酶,都要经过一系列研究的毒理试验。关于食品用酶,美国需要得到FDA的批准。目前已同意使用的仅仅少数微生物能用于生产食品用酶。 α—淀粉酶:黑曲霉、米曲霉、米根酶、枯草牙孢杆菌 和地衣牙孢杆菌 三、常用的基因表达系统 (一)原核生物:大肠杆菌(1977年Boyer)、枯草牙胞杆菌 沙门氏菌 生长迅速、蛋白产量高; 表达蛋白的纯化、分离及分析快速; 外源基因的导入相对容易; 已建立了整套表达理论及技术. (二) 真核细胞表达系统 酵母(既是微生物又是真核细胞) 生长迅速,营养要求不高,易培养; 安全性好; 比哺乳动物细胞操作简单; 具有一定的修饰蛋白的能力。 中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)表达系统 具有准确的转录后修饰功能; 具有产物胞外分越功能,便于下游产物分离纯化; 具有重组基因的高效扩增和表达能力; 具有贴壁生长特性,也可进行悬浮生长; CHO很少分泌自身的内源蛋白。 微生物(包括动、植物细胞)几乎可以生产我们所需的一切产品,但是涉及到工业化生产对于某一种特定的产品,只有特定的微生物才具有大量表达的潜力。 问题: 生产抗生素的微生物能不能用于生产氨基酸? 礼来(Eli lilly),花了10年的时间从40万株微生物中,发现了三种有潜力的新抗生素。 例: 第三节 自然界中有目的微生物分离的原则 一、菌种分离的一般过程 土样的采取 → 预处理 → 培养 → 菌落的选择 → 产品的鉴定 如何使样品中所含微生物的可能性大 如何在后续的操作中使这种可能性实现 目的:高效地获取一株高产目的产物的微生物 问题: 二、采样时要注意的问题 气候、水分、空气 来源要广 结合产品的特点 标签:地点、时间、气候等 富集的三种方案: 定向培养:采用特定的有利于目的微生物富集的 条件,进行培养。 三、目的微生物富集的一些基本方法 富集的目的: 让目的微生物在种群中占优势,使筛选变得可能。 当不可能采用定向培养时,则可设计在一

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