生物分析纯化技术实习报告.doc

这周我们进行了生物分析纯化技术实习，一周的实习虽然有些短暂，但是我们的收获是丰富的，在这一周里我们进一步将理论联系实际，掌握生物技术产物有效成分提取、分离和检定的基本操作技能，提高了我们分析和解决问题能力。养成了严密的科学态度和良好的工作作风。 我们这次实习的要求如下： 1．遵守实验室制度，维护实验室安全，不违章操作，严防爆炸、着火、中毒、触电、漏水等事故的发生。若发生事故应立即报告指导教师。 2．实验前作好预习，明确实验内容，了解实验的基本原理和方法，安排好当天计划，争取准时结束。实验过程应养成及时记录的习惯。凡是观察到的现象和结果及有关的重量、体积、温度或其他数据，应立即如实记录，实验完毕后，认真总结，写好报告，提取纯化所得单体产物包好，贴上标签（日期、样品名称、纯度、TLC、重量）交给老师。 3．实验室中保持安静，不许大声喧嚷，不许抽烟、不迟到、不随便离开，实验台面应保持清洁，使用过的仪器及时清洗干净，存放在实验柜内，废弃的固体和滤纸等丢入废物缸内，绝不能丢入水槽、下水道和窗外，以免堵塞和影响环境卫生。 4．公用仪器及药品用完后立即返还原处，破损仪器应填写破损报告单，注明原因。节约用水、用电、药用试剂。严格药品用量。 5．保持实验室内整洁，学生采取轮流值日，每次实验完毕，负责整理公用仪器，将实验台、地面打扫干净，倒清废物缸，检查水、电、气和门窗是否关闭。 学习了实习要求与规则之后，我们就正式进入了实验，我们系统的学习了薄层板的制备、活度测定及样品定性分析，并且掌握了薄层板的制备及薄层层析的操作方法和吸附剂活度测定的原理及方法学会了应用薄层层析法检测识中草药化学成分。 一、薄层板的制备具体有以下几种方法： 1．不加粘合剂的薄层涂布法 （1）氧化铝薄层（2）纤维素薄层（3）聚酰胺薄层 2．加粘合剂薄层的涂布法 （1）硅胶G薄层 （2）硅胶（H）羧甲基纤维钠（CMC-Na）薄层 3．特殊薄层的制备 二、根据分离工作的特殊需要，可制成以下几种特制薄层。 （1）酸、碱薄层和pH缓冲薄层（2）络合薄层 三、吸附剂的活度测定 1．氧化铝活度的测定2．硅胶活度的测定 四、薄层层析的应用 薄层层析法在天然产物化学成分的研究中，主要应用于化学成分的预试、化学成分的鉴定及探索柱层分离的条件。用薄层层析进行中草药化学成分检识，可依据各类成分性质及熟知的条件有针对性地进行。由于在薄层上展开后，可将一些杂质分离，选择性高，可使预试结果更为可靠，不仅可通过显色获知成分类型，而且可初步了解主要成分的数目及其极性大小。 具体进行的试验项目有： 薄层层析法对蛋白质水解液的氨基酸种类分析 目的:掌握硅胶G薄层层析的基本技术,了解薄层层析的一般原理以及层析技术的优点， 原理:薄层层析是将固相支持物(也叫吸附剂)均匀铺在玻璃板上使之成为薄层,将待分析的样品点到薄层板的一端,然后将点样端浸入适宜的扩剂中,在密闭的层析缸中展层。 由于各种氨基酸的理化性质(分子极性、分子大小和形状、分子亲和力等)的不同，使其在吸附剂表面的吸附能力各异。当展开剂在薄层板的毛细管中移动时，点在薄板上样品的组分就不同程度地随着展开剂的移动而移动，使不同的氨基酸得以分离。 薄层层析法操作简便、快速、灵敏、分离效果好、显色容易，被广泛应用于氨基酸、多肽、核苷酸、脂类、类、生物碱等多种物质的分离和鉴定。 仪器:硅胶G薄层板、毛细管、层析缸、电吹风、喷雾器、烘箱 试剂: 1、 硅胶G 2、 粘合剂：0.5%的柠檬酸与1%的羧甲基纤维素钠混合，煮沸至无气泡，冷却静止分层后用。 3、 蛋白质水解液（或混合氨基酸） 2、扩展剂：正丁醇:冰乙酸:水=4:1:2 3、显色剂： 0.1%水合茚三酮正丁醇溶液 实验步骤: （一） 薄层板的制备 1、调浆 称取硅胶14克，加粘合剂25毫升，置于研钵中充分研磨成均匀的膏状。 2、涂布 取洁净的干燥玻璃板（20×20）2块置于涂布器上均匀涂层。 3、干燥 将玻璃板水平放置，室温下自然凉干。 4、活化 凉干的薄层板置于烘箱内，至105℃活化30分钟，切断电源，待玻璃板面温度下降至不烫手时取出。 （二）点样 活化后的硅胶板室温冷却后，在距底边2cm水平线上均匀确定3个点。用毛细管分别吸取氨基酸溶液，轻轻接触薄层表面，每次加样后原点扩散直径不超过3mm，干后再点一次。 （三）展层 在层析缸中加入扩展剂1cm厚，加盖平衡0.5小时。将薄层板点样端浸入扩展剂，扩展剂液面应低于点样线。盖好层析缸盖，上行展层。当展层剂前沿离薄板顶端2cm时，停止展层，取出薄板，用铅笔描出溶剂前沿界线，用热风吹干。 （四）显色 用喷雾器均匀喷上显色剂，在85℃下烘干，即可显出各层析斑点。 结果计算: 小心量出原点至溶剂前沿，以及各斑点