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动物细胞培养和 核移植 技术学案 动物细胞培养和核移植技术学案2011-08-1816:27 动物细胞培养和核移植技术学案 学习目标: 1.了解动物细胞培养的过程 2.比较动物细胞培养与植物组织培养区别 3.掌握动物体细胞核移植技术克隆动物的过程和应用前景 学习重难点: 动物细胞培养的过程。 动物体细胞核移植技术的原理。 学习过程 【复习巩固】 1.细胞的全能性: 2.植物组织培养: 3.植物体细胞杂交: 相关知识链接 1.胰蛋白酶2.影响酶活性的因素3.培养基和培养液4.植物体细胞杂交 自主探究 动物细胞工程常用的技术手段有__、_、__、__等。其中，__是其他动物细胞工程技术的基础。 一.动物细胞培养 1.为什么要进行动物细胞培养? 2.动物细胞培养概念: 动物细胞培养就是从动物机体中取出相关，将它分散成，然后放在适宜的中，让这些细胞生长和增殖。 3.动物细胞培养过程: 培养动物所用的细胞大都取自_或出生不久的_器官或组织(因为这些组织或器官中的细胞)。将组织取出来后，先用_等使组织分散成单个细胞，然后配置成一定浓度的。放在培养瓶中的具有一定浓度的细胞悬浮液在培养箱中培养的过程叫做_;随着细胞生长的和增殖，培养瓶中的细胞越来越多，需要定期地用_使细胞从瓶壁上脱离下来，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中培养，这称为_。传代细胞中遗传物质没有发生改变的叫做_;遗传物质发生了改变，并且带有_的特点，这种传代细胞叫做_。 动物胚胎或幼 龄的器官组织 剪碎 胰蛋白酶 加培养液 原代培养 传代培养 细胞株 遗传物质改变 传代培养 细胞系 (培养条件下无限传代代) 细胞悬浮液 10代细胞 原代培养 50代细胞 细胞株 传代培养 细胞系 ☆细胞株和细胞系的界定 思考:1.幼龄与老龄动物的组织细胞比较，分化程度低的与分化程度高的组织细胞比较，哪一种更易于培养?思考一下，这是什么道理? 提示:细胞的衰老与动物机体的衰老有着密切的关系，细胞的增殖能力与供体的年龄有关，幼龄动物细胞增殖能力强，有丝分裂旺盛，老龄动物则相反。所以，一般来说幼年动物的组织细胞比老年动物的组织细胞易于培养。同样，组织细胞的分化程度越低，则增殖能力越强，所以更容易培养。 2.进行动物细胞传代培养时用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是什么成分?用胃蛋白酶行吗? 提示:用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是蛋白质。胃蛋白酶作用的适宜pH约为2，当pH大于6时，胃蛋白酶就会失去活性。胰蛋白酶作用的适宜环境pH为7.2~8.4。多数动物细胞培养的适宜pH为7.2~7.4，胃蛋白酶在此环境中没有活性，而胰蛋白酶在此环境中活性较高，因此胰蛋白酶适宜用于细胞培养时的消化。 胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗?为什么? 提示:胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白外，长时间的作用也会消化细胞膜蛋白，对细胞有损伤作用，因此必须控制好胰蛋白酶的消化时间。 3.什么是细胞贴壁? ⑴、概念:指培养过程中，细胞贴附在瓶壁上的现象。 ⑵、培养贴附性细胞的要求:培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒。 4.什么是接触抑制? 指贴壁细胞因为表面相互接触时导致细胞停止分裂增值的现象。 5.什么是原代培养? 指动物组织经过胰蛋白酶处理后的初次培养。一般能传代约10代，得到细胞株。细胞株的遗传物质与原细胞相比并没有发生改变。 6.什么是传代培养? 指贴壁生长的细胞(10代后)经胰蛋白酶处理后的继续培养，得到细胞系，能无限传代。 细胞系的细胞已经发生突变，基本上具有癌细胞的特性。 7.动物细胞培养要经过脱分化的过程吗?为什么? 提示:脱分化又称去分化，是指分化细胞失去特有的结构和功能变为具有未分化细胞特性的过程。植物的任何一部分，甚至单个细胞都具有长成完整植株的能力。但要发育成完整植株，必须先脱分化，脱分化的细胞具有发育成任何组织的能力，然后进行再分化，形成完整植株。植物细胞培养主要用于农林生产中的作物、苗木育种，快速繁育种苗、培育无病毒植株等，这就要求植物的组织或细胞先进行脱分化。动物细胞的培养有各种用途，一般而言，动物细胞培养不需经过脱分化过程。因高度分化的动物细胞发育潜能变窄，失去了发育成完整个体的能力，所以，动物细胞也就没有类似植物组织或细胞培养时的脱分化过程了。要想使培养的动物细胞定向分化，通常采用定向诱导动物干细胞，使其分化成所需要的组织或器官。 4.动物细胞培养的条件 动物细胞培养的条件有: ⑴:对和进行无菌处理，还可在培养液中添加一定量的。此外，应定期。 ⑵:合成培养基中有、、、、等，通常需加入和。 ⑶:适宜温度为，适宜pH为。⑷:主要是和。 思考:1.动物细胞培养液的成分和性质? 提示:水、无机盐、葡萄糖、氨基酸、维生素和动物血清，属于液体培养基 2.为什么对动物细胞进行培养时通常