动物繁殖学第8讲雄性生殖生理及其调控技术课件.pptVIP

第三章 雄性生殖生理及其调控技术 DNA CONTENT OF X AND Y SPERM Species Difference (%) HUMAN 2.9% RABBIT 3.0% SWINE 3.6% CATTLE 3.8% DOG 3.9% HORSE 4.1% SHEEP 4.2% TURKEY 0% 分离精子的理论基础 X/Y精子DNA含量不同 流式细胞仪精子分离理论基础 X和Y精子DNA含量存在差异（XY）; 荧光染料HOECHST 33342 着色差异; 激光照射后荧光信号差异--X强于Y; 荧光信号通过分离仪信息芯片处理； 含X/Y精子的液滴通过高压电场处理； 携带不同电荷的液滴在电场作用力的引导下，落入左右两旁的收集容器中，X精子和Y精子得以分离。 流式细胞仪精子分离效率 回收率低 大量精子浪费 准确性高 可达90%以上 成本高 奶牛性控冻精200元/支 比较 普通冻精标准 800万/ml 性控精液 200万/ml 各种家畜新鲜原精液，活力一般为0.7~0.8左右，牛的一般比水牛的高，驴的比马的高，猪的浓份精液其活力与牛的相似。为了保证有较高的受胎率，输精用的精子活力通常液态保存精液在0.5以上，冷冻精液在0.35以上。 原精液精子密度大，很难区分单个精子的运动方式，影响活力评定。因此，在进行精子活力评定时，要用优质稀释液将原精液稀释（约25×106个精子/mL）。 精子畸形根据其发生的时期可分为： 初级畸形：指睾丸生精功能障碍所致的畸形，主要表现为精子头部的畸形，包括头部异常和顶体缺隐； 次级畸形：指由附睾和输出管功能障碍引起的畸形，表现为尾部中段有原生质滴。 三级畸形：指精子在体外受不良环境因素影响，所致的畸形，表现为其他尾部缺陷。 精子畸形根据发生的部位可分为四类 头部畸形：如头部巨大、瘦小、细长、圆形、轮廓不明显、皱缩、缺损、双头等 颈部畸形：如颈部膨大、纤细、屈折、不全，带有原生质滴、不鲜明、双颈等 中段畸形：如中段膨大、纤细、不全、带有原生质滴、弯曲、曲折、双体等 主段畸形：如主段弯曲、屈折、回旋、短小、长大、缺陷、带有原生质滴、双尾等 影响精液品质的因素有哪些？ 精液品质检查的基本原则是什么？ 精子形态检查主要分几项内容，每项如何检查？ * * （2）死活精子计数法 利用活精子不被某些染料着色，而死精子则因表面膜（特别是头部）的渗透性增加易被着色这一特性，来区分死精子和活精子，从而计算死活精子的比例 常用的染色剂是伊红、刚果红，用作背景染色的染料有苯胺黑、苯胺蓝、亚尼林蓝和快绿等。但一般认为伊红-苯胺黑最为理想 华中农业大学动物科技学院 * * 方法：将伊红配成5%溶液，苯胺黑用等渗溶液（如0.9%的氯化钠）配成1%的溶液；在载玻片上滴2滴苯胺黑溶液，在其旁边滴1滴伊红溶液；将1滴精液滴入伊红溶液中，充分混匀后再与苯胺黑溶液混合，搅拌后制成抹片镜检，此时背景为黑色，死精子为粉红色，活精子不着色。通常检查500个精子，计算其中死活精子比例。染色液的pH值、渗透压及染色时的温度对检查结果有一定的影响。因此，要求染色液pH为6~8左右，均为等渗，在整个染色过程中温度保持在37℃左右。由于甘油能使精子细胞膜的渗透性增强，所以，本法不适用于冷冻精液的检查。 华中农业大学动物科技学院 * * 由于一些非直线前进运动的活精子也可能不着色，所以由此测得的结果，比按前进运动目测评定的精子活力往往偏高，但两者高度相关。因此，可以作为目测精子活力的补充证明 华中农业大学动物科技学院 * * 其他还有一些可以对精子活力进行客观评定的方法，如定时显微照相术（time-lapse photomicrography，TLP）、分光光度测定法和计算机辅助精液分析（computer-assisted semen analysis，CASA）系统等。仪器精确，结果客观，但价格昂贵，尚难在生产实践中推广应用。 华中农业大学动物科技学院 * * 3.精子形态检查 （1）精子畸形率（abnormal sperm rate，ASR）检查 凡形态和结构不正常的精子通称为畸形精子。在正常精液中也有一定比例的畸形精子，但一般不会超20%。优质精液，精子畸形率不能超过如下数值，即牛18%、水牛15%、羊14%、猪18%，马12%、狗20% 华中农业大学动物科技学院 * * 畸形精子类型图 1.正常精子 2.游离原生质滴 3.各种畸形精子 4.头部脱落 5.附有原生质滴 6.附有远侧原生质滴 7尾部扭曲 8.顶体脱落 马 牛 水牛 猪 绵羊 华中