动物繁殖学第10讲卵子发生及其形态结构与体外保存课件.pptVIP

3．卵母细胞的成熟 卵母细胞的成熟经过两次成熟分裂 第一次成熟分裂：在排卵前不久完成的，分裂末期，纺垂体旋转，排出有一半染色体及少量细胞质的极体，染色体数目减半。 第二次成熟分裂：染色体是单倍体，排出的卵大多数处于分裂中期，直到精子进入透明带，被激活才能完成分裂。 营养来源不同 发生的连续性 形成的数量不同 排出时两者成熟度不同 最终两者形态不同 相对而言,卵母细胞在卵巢中的储备是有限的,而精子的产生是无限的 未成熟卵母细胞 脱去卵丘的未成熟卵母细胞 1．慢速冷冻、慢速解冻法 平衡冷冻法。卵母细胞用冷冻保护剂平衡处理后开始降温，在-6~-7℃植冰。然后，以0.1~1℃／min的速度降至-80℃。停留一段时间后，投入液氮。解冻速度低于25℃／min 优点：脱水完全，细胞内不易形成冰 缺点：费时，冷冻保护剂处理细胞的时间过长 华中农业大学动物科技学院 1977年，Whittingham，小鼠的成熟卵母细胞 1990年，Schroder 以DMSO为冷冻保护剂用该法冷冻了小鼠GV期及成熟卵母细胞，二者的形态正常率分别为69％和81％，受精后发育为2-细胞的比例分别为9％和17％，前者无一发育为胚泡，而后者有8％发育为胚泡 1．慢速冷冻、慢速解冻法 华中农业大学动物科技学院 2．慢速冷冻、快速解冻法 慢速冷冻至-80℃，再以25℃／min以上的速度解冻。解冻一般在室温或37℃水浴中进行 用该法冷冻卵母细胞的报道不多，效果也不理想 华中农业大学动物科技学院 3．快速冷冻、快速解冻法 卵母细胞用冷冻保护剂平衡处理及植冰以后，以0.1~1℃／min的速度冷冻至-30℃~-40℃，停留一段时间后投入液氮 解冻在室温或37℃水浴中进行 Fuller等人（1984）以甘油作冷冻保护剂冷冻的小鼠成熟卵母细胞，54％完成IVF Lee（1993）用1.5mol/L丙二醇和1.5mol/L乙二醇分别处理小鼠GV期卵母细胞，冷冻解冻后存活率分别为55.3％和59.9％ 华中农业大学动物科技学院 4．一步冷冻法 一步冷冻法省去解冻后脱除冷冻保护剂的步骤。其要点是冷冻细管里装有培养液、冷冻液和稀释液。该法很适合于冷冻胚胎运输到条件较差的地区移植时使用，但Ko等（1988）以2.0mol/L 丙二醇作冷冻保护剂、以0.5mol/L蔗糖作稀液用该法冷冻了小鼠成熟卵母细胞，形态正常率及存活率分别为55.2％和17.6％ 华中农业大学动物科技学院 5．玻璃化法 基本原理:冷冻前用高浓度低温保护剂置换细胞中的水，使冷却时粘滞性增加，当粘滞性达到临界值时而发生固化，溶液变为玻璃样，而细胞内不形成冰晶。用玻璃化溶液对卵母细胞短暂处理后，直接投入液氮保存，解冻时快速进行 简单、快速、有效，不需要冷冻仪 华中农业大学动物科技学院 思考题 图示卵巢的解剖结构与名称。 卵巢产生的激素有哪些? 试述雌性动物初情期的主要生理变化。 哪些因素影响初情期的年龄? 为什么大家畜在性成熟时仍不能进行配种? 什么叫卵子发生?试比较与精子发生的差异。 华中农业大学动物科技学院 何谓卵泡?试述卵泡发育过程的形态与结构变化。 绘出成熟卵泡结构图并标示各部位的名称。 发情周期的分期有几种分类方法?叙述分期各阶段的生理特征。 黄体是如何形成的?动物的黄体有几种类型? 叙述发情周期的激素调节机制。 思考题 华中农业大学动物科技学院 三、卵母细胞成熟机理 卵母细胞的成熟是指卵母细胞获得恢复减数分裂以及进一步发育到第二次减数分裂，为受精及胚胎发育做准备的过程，是完成正常受精及早期胚胎发育的必需条件，包括细胞核成熟和细胞质成熟 华中农业大学动物科技学院 四、卵母细胞体外成熟 获取成熟卵母细胞主要通过以下两条途径： 体内成熟，经超排处理后，采取成熟卵泡内的卵母细胞或从输卵管内回收刚刚排出的卵母细胞 体外成熟（in vitro maturation，IVM），采集卵泡中未成熟的卵母细胞，经体外培养使之成熟。可充分利用母畜的卵巢，是解决卵子来源最有效的途径 华中农业大学动物科技学院 （一）卵母细胞的采集方法 1. 卵母细胞的离体采集 母畜屠宰后，在30min内取出卵巢，放入盛有灭菌生理盐水或PBS的保温瓶内（25℃-35℃）中，在3h内送回实验室进行回收 ⑴ 卵泡抽吸法 ⑵ 卵巢解剖法 华中农业大学动物科技学院 ⑴ 卵泡抽吸法 操作：用针头穿刺卵泡而将卵母细胞抽吸出来。注射器应保持一定的负压，针头一般从卵泡的侧面刺入，一次进针可抽吸卵巢皮质的多个卵泡，不要只吸取一个卵泡就将针头拔出，否则容易导致污染 优点：回收速度快，不易造成卵母细胞的污染 缺点：容易损伤卵母细胞周围的卵丘细胞，影响其随后的成熟 （一）卵母细胞的采集方法 华中农业大学动物科技学院 ⑵ 卵巢解剖法