动物繁殖学课件4转基因与克隆.pptVIP

转基因动物的研究 首例整合有不同外源基因的转基因动物 转基因兔 (Brem 1985) 转基因绵羊 (Hammer 1985) 转基因猪 (Hammer 1985) 转基因牛(Roschlau1989) 转基因山羊 (Ebert 1991) 转基因鱼 (朱作言1986) 转基因鸡 (Sang 1994) 制备转基因动物的基本过程 （上游） 目的(外源)基因的克隆及重组 （中游） 重组(外源)基因向载体细胞的转移 ( 依据外源基因的性质、受体动物和载体细胞的类 型，常采用反转录病毒转染、干细胞转移、电击法、精子携带、显微注射等不同的技术途径。) （下游） 转基因的检测及转基因动物的培育 出于安全性考虑，反转录病毒转染法主要是作为实验手段应用于转基因动物的研究。 己培育了许多种(如白血病、高血压、肿瘤、老年病等)转基因小鼠，使人类对致病基因的发病机理、遗传规律及基因表达与结构、环境因素的关系有了一个深入的了解，从而能进行科学的诊治。 目前，国际上己有多种转基因动物（绵羊、山羊、猪和牛）能生产上百种医用蛋白，其中有30余种进入Ⅱ、Ⅲ期临床，有的也己进行商业开发，产生了良好的经济效益，正逐步发展成一新兴产业。 全球排名前50位的医药企业，有75%投入转基因动物的研发。 器官移植已成为治疗多种器官衰竭的有效手段，因人类同种移植器官的日益缺乏，人们希望能实现异种器官的移植。猪在解剖、生理等方面与人具有较大的相似性，且易繁殖饲养被选为人类移植用异种器官的主要供体动物。 异种移植目前最大的障碍，便是受体对异种器官的超急性排斥反应，克服这一障碍便成为异种器官移植成功的一个关键。 应用转基因技术，培育表达人补体调控蛋白，如人膜辅助因子蛋白（human membrane cofactor protein MCP）、人衰变加速因子（human decay-accelerating factor DAF）的转基因猪，有望抑制或减弱人补体对猪器官的攻击。 图为2001年12月底出生的5只可爱的转基因克隆小猪。据培育者英国PPL医疗公司称，这些转基因小猪将为研究和“生产”适用于人体移植手术使用的动物器官提供巨大的帮助。 表达混乱：1.不在预期的组织内表达； 2.子代表达情况不同；3.同一启动子在不同个体或不同动物中表达行为不同；4.整合不表达。 因外源基因的表达，受多种因素调节，如基因结构与整合位点，与转录有关的顺式结构和反式调节因子，外源基因在宿主体内的甲基化程度及环境因素等，这些众多的因素虽难以完全控制，但在外源基因构建时，应考虑与表达相关的调控元件。 动物克隆的生理基础 ＊ 动物克隆所依赖的理论基础是细胞潜在全能性学说。即细胞包含个体的全部遗传信息，并在特定环境 因素的调节下，可回到与受精卵一样的状态，从头开始发育成一个完整的生物个体。 ＊ 在细胞分化过程中，细胞核全能性的潜能受到阻遏。体细胞克隆的成功，说明卵子或卵母细胞能够逆转这种阻遏过程，解除细胞核的阻遏状态，使其恢复多能性，甚至全能性。 ＊现证明，高等动物的大部分细胞核完整的保存着源于卵子和精子细胞核的全套遗传信息。 1、从芬兰多塞特母绵羊的乳腺中取出乳腺细胞，此细胞称之为供体细胞； 2、从一头黑面母绵羊的卵巢中取出未受精的卵细胞，并立即将其细胞核除去，留下一个无核的卵细胞，此细胞称之为受体细胞 3、利用电脉冲的方法，使供体细胞和受体细胞发生融合，最后形成了融合细胞，使融合细胞也能象受精卵一样进行细胞分裂、分化，从而形成胚胎细胞； 4、将胚胎细胞转移到另一只苏格兰黑面母绵羊的子宫内，胚胎细胞进一步分化和发育，最后形成一只小多莉。 体细胞克隆的技术路线 　　 1997年2月，苏格兰科学家用从一只6岁母羊的乳房上取下的组织克隆了绵羊“多莉”。这是人类历史上首次成功地克隆哺乳动物。 　 1997年7月，使用在实验室内培养产生并植入了一个人类基因的绵羊体细胞，苏格兰科学家克隆了绵羊“波莉”。　 1998年7月，美国夏威夷大学的研究人员用一只实验鼠的细胞克隆了3代共50只实验鼠。 1999年4月，美国马萨诸塞州塔夫茨大学的遗传学家克隆了3头山羊，改变了它们的基因性状，使它们的乳液内含有一种对心脏病具有疗效的蛋白质。 2000年，美