动物繁殖学第17讲繁殖新技术课件.ppt

华中农业大学动科动医学院 第十章 繁殖新技术 第四节 克隆技术 克隆，是Clone的译音，意为无性繁殖，克隆技术即无性繁殖技术。 胚胎分割 细胞核移植 一、胚胎分割技术 概念：是指利用机械或化学方法人为地将一个植入前的胚胎分割成两个或多个部分，然后在适宜的条件下进行体外培养、移植回受体子宫或输卵管（或不经过培养直接移植），从而人工制造同卵双生或同卵多生的技术 方法：显微操作仪分割、徒手分割 意义：充分利用优良种公、母畜 显微操作仪分割 在操作仪操纵下，左侧用固定吸管固定胚胎，右侧用切割刀（针）的切割部位放在胚胎的正上方，并垂直施加压力，当触到平皿底时，稍加来回抽动，即可将胚胎的内细胞团从中央等分切开，也可以只在透明带上作一切口，切割并吸出半个胚胎 成功率高，但需要昂贵的仪器设备。 显微操作系统 徒手分割 先用0.1%~0.2%链霉蛋白酶软化透明带，在实体显微镜下，用自制切割针直接等分切割胚胎，为防止切割时胚胎滚动，可将胚胎置于微滴中进行分割，分开后及时加入液体 简单易行，但需要有灵巧而熟练的操作技能 二、核移植 所谓核移植技术就是利用显微操作技术将一个细胞的细胞核移植到另一个细胞中，或者将两个细胞的细胞核（或细胞质）进行交换，从而可能创造无性杂交生物新品种的一项技术。 胚胎核移植（胚胎克隆） 过程： 卵裂球（受精）→→细胞核→→ 核的成熟卵母细胞→→ 新的受精卵→→发育成胚胎→→ 胚胎移植→→子宫→→胎儿→→分娩 广义的克隆（有性繁殖）： 牛胚胎移植和克隆 体细胞核移植 体细胞核→→基因全能化→→ 去核的成熟卵细胞→→胚胎→→胚胎移植→→子宫→→胎儿→→分娩 体细胞核移植===克隆 二、 胚胎核移植（胚胎克隆） 程序： 供体核的分离技术 受体细胞的去核技术 核卵重组技术 重组胚的融合技术 核移植胚激活、培养、移植或重复克隆技术 1．供体核的分离技术 供体细胞的准备： （1）胚细胞： 2-细胞胚胎~囊胚ICM均可，一般选16-~32-细胞期胚胎 （2）体细胞： ①来源于生殖系统的细胞：如成年乳腺上皮细胞、卵丘/颗粒细胞、输卵管/子宫上皮细胞、睾丸支持细胞等 ②来源于胎儿细胞：如胎儿成纤维细胞 ③来源于成体除生殖系统以外的细胞：如成体耳部成纤维细胞、肌肉组织细胞和小鼠尾尖细胞等； ④终末分化的细胞，如B或T淋巴细胞，神经细胞。 （3）ES：理想的供体细胞 1．供体核的分离技术 供体细胞周期的调控 G2或S期 DNA复制形成多倍体而死亡 G0（生长停滞期）或G1期效果好 采用血清饥饿法处理，使细胞周期停滞在G0期或G1期 2．受体细胞的去核技术 （1）透明带切开法（两步法） （2）一步法 3．核卵重组技术 按供体核移入部位的不同分为卵周隙注射和胞质内注射 卵周隙注射：在显微操作仪操纵下，用去核吸管吸取一枚分离出的完整卵裂球，注入去除核的受体卵母细胞的卵周隙中 胞质内注射：先将供体细胞的核膜捅破，形成核胞体，再将核胞体直接注入到去核卵母细胞的细胞质中，然后进行激活处理 4．重组胚的融合技术 （1）仙台病毒法 （2）电融合法 将重组胚直接放在融合小室内，使核－质接触面与电流方向相垂直，在一定的电场强度下，给予一定时间的直流电脉冲，依靠直流脉冲使细胞膜产生可逆性的微孔，进而导致融合 5．核移植胚的激活、培养、移植或重复克隆技术 融合后的重组胚经化学激活或电激活后，在体外培养或经过中间受体培养至桑椹胚或囊胚，然后移入与胚龄同期的受体动物子宫角内，获得克隆后代,获得的早期胚也可作为供体核重新克隆 重组胚激活: 化学激活 电激活 克隆技术的伦理学问题 生殖性克隆or治疗性克隆？ 胚胎的伦理学地位？ 1998年 克隆批量化　　 美国俄 勒冈州 沃尔小 组成功 克隆两 只恒河 猴。 克隆猪 同年，帮助培育出多利羊的生物技术公司克隆出5只小猪仔，并宣称克隆猪终将成为人类移植器官的“加工厂”，生产器官包括角膜、皮肤、肾、肝 、肺、心脏等。 2001年—至今关于克隆人 关于克隆人的问题争论的很激烈，在理论上，利用同样方法，人可以克隆人，但各国至今还不允许克隆人。 2001年，美、意科学家联手展开克隆人体胚胎的工作。11月，美国科学家宣布首 次克隆成功了处于早期阶段的人类胚胎， 称其目标是为病人“定制”出不会诱发排异 反应的人体细胞用于移植。 2004年8月11日英国颁发全球首张“克隆 人类胚胎”执照，合法执照有效期为一年，胚 胎14