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一、线性试验 主成分含量测定 以测定浓度为100% ，50%~120%之间选取5个点即可。使用对照品配制 溶出（释放）度测定 以释放量的10%～120%间选取5个点即可。 杂质含量用杂质对照品准确测定 以杂质限度为100% ，50%~120%之间选取5个点即可。 测定结果：1）阐述如何看待截距和斜率、如何应用。2）误差在哪里，应用时的注意事项。3）为什么没有不成线性的？通常C、H、O、N结构，紫外监测器决定。 个别化学键所致。梯度洗脱时，有时会出现不成线性。4）都成线性、为何还要做？最小二乘法的原理知晓。何种情况不呈线性？ 不呈线性情况：1）分子结构式怪异，如唑来膦酸。2）梯度洗脱，所以此时规定柱效无意义。 3）主成分在色谱柱上几乎无保留，保留时间为“死时间”（如氢溴酸右美沙芬的测定） 4）浓度过高时、检测器或色谱柱超载。 引申使用：1）有关物质测定 归一化法和自身对照法的相互妙用。在研究中可用归一法和自身对照法进行研究，稳定性可用归一法检测2）缓释制剂溶出度测定，对照品浓度设定为中间浓度。举例说明。3）回收率试验为何做80%~120%即可？亦及样品浓度与对照品浓度接近到何等程度的理解。4）国内只注重相关系数，不注重截距。 二、精密度试验 重复性试验：连续进样6次。 中间精密度试验和重现性试验通过“耐用性试验中的溶液稳定性试验”来体现。 浓度极低时才会不理想，加大进样量。 色谱峰形极为重要，对称性、柱效等参数。加大柱温、增加流动相中有机相比例，使被测物质峰尽快出峰。 三、准确度试验 用回收率来衡量 作法：在80%~120%间选择3点或5点，原因是由外标一点法决定的。 已知杂质、且有杂质对照品的，可采用加入法，即加样回收率来评价。 一般情况下，只要空白辅料无干扰，回收率均是良好的！ 四、专属性 有关物质为主，其他检测项目（含量）基本上均参照有关物质。 有关物质的验证，采用中间体和降解产物（确认结构后人工合成）来验证与主成分的分离。 详述强破坏试验的宗旨与内涵！ 系统适用性试验用溶液配制法 在100％浓度的主成分溶液中加入1%浓度的杂质对照品，以模拟样品中有可能存在的状态。 介绍配制方法：先配制杂质贮备液，再用供试品溶液（或浓的对照品溶液）来稀释，简便、易行！ 存在问题：配制相同浓度，测定样品时，主成分峰骤然加大，将杂质峰覆盖。 强破坏试验的目的 验证药品在遭遇了极端的气候环境条件下产生的杂质，在所建立的色谱条件下是否能够分离、测定。 破坏追求的目标：可产生降解产物的条件下，主成分保留70~80%量。 同时采用DAD 检测主峰纯度，验证其中不含杂质峰。★ 保留时间的设定 经过上述方法学认证后，确定供试品溶液的保留时间，通常以洗脱出全部杂质和经强力破坏试验出的杂质，规定至主成分保留时间的几倍为止。 强力破坏试验（世界卫生组织公布的最新方法）※ 热破坏 取原料，加溶剂配成1:1溶液后，在60℃放置 1~10天。※ 高湿破坏 取原料固体适量，放置在75%湿度下1~10天。※ 强酸破坏 取原料适量，用0.1mol/L盐酸溶液配制成2:1 溶液后，放置1-10天。※ 强碱破坏 取原料适量，用0.1mol/L氢氧化钠溶液配制成 2:1溶液后，放置1-10天。 ※ 氧化破坏 取原料适量，用3%过氧化氢溶液配制成1:1溶 液后，放置1-3天。※ 光解破坏 取原料适量，置紫外灯下放置1-10天。※ 金属离子破坏 加入0.05mol/LFe2+ 或Cu2+。 四、检测限 信噪比的三倍 —— 纯属“纸上谈兵”，实际测定中根本用不上。● 是相对值，不是绝对值。是相对于供试品溶液浓度的多少分之一而言，一般至少要在5000倍以上。 (1)最大进样量 (2) 有关物质测定供试品溶液浓度、(3)含量测定浓度 (4)有关物质测定自身稀释对照溶液浓度(5)最低检出限 五者间的比例关系 浓 度 进样量 绝对量 相当于供试品 溶液浓度的 倍数关系 最大进样量 0.3mg/ml 10μl 有关物质供试品溶液浓度 0.1mg/ml 10μl 1μg 100% 10000倍 含量测定浓度 10μg/ml 10μl 10% 1000倍 有关物质自身稀释对照溶液浓度 1.0μg/ml 10μl 10ng 1.0% 100倍 最低检出限 10ng/ml 10μl 0.1ng 0.01% “基准点” 检测波长的确定与杂质校正因子的引入 原理：通常选取主成分最大吸收波长