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大麻性别的RAPD标记（2.5Kb雄性片段） 小麦品种复壮30抗白粉病基因RAPD标记 葡萄抗黑痘病RAPD标记（600bp左右） 作业 利用基因工程手段进行植物分子育种的优势及目前存在的问题？你认为它发展前景如何？ 推荐读物 1. 王关林，方宏筠，植物基因工程原理与技术。北京：科学出版社，1998 2. 许志宏，植物生物技术。北京：科学出版社，1999 3．莽克强，农业生物工程。北京：化学工业出版社，1998 分子杂交（ Southern杂交和 Northern杂交） 核酸分子杂交是指同一分子来源但具有互补序列的两条多核苷酸链，通过碱基配对形成稳定的双链分子的过程。 其中的一条链被标记上，该标记可以通过某种特定方法检测出，即是被合成的探针。探针与其互补的核苷酸序列杂交后，杂交体也就带上了同样的标记，可以被检测出来。它具有灵敏性高、特异性强的特点，是目前鉴定外源基因整合及表达的权威方法。根据杂交时所运用的方法，核酸分子杂交可分为印迹杂交、斑点杂交、细胞原位杂交等。 用于鉴定转基因植株的杂交有Southern杂交和Northern杂交。 Southern杂交是以DNA为探针，检测DNA链，用于检测外源基因是否整合到植物染色体及插入的拷贝数；Northern杂交以DNA为探针，检测RNA链，用于检测外源基因的转录。 提取的基因组DNA凝胶电泳结果图 基因组DNA Southern酶 切结果图 杂交炉 转基因植株Southern鉴定 （2）外源基因转录水平的鉴定 基因表达分为转录及翻译两阶段，转录是以DNA为模板合成mRNA的过程，翻译是以mRNA为模板合成蛋白质的过程，检测外源基因的表达就是检测特异mRNA及特异蛋白质的生成。 所以基因表达检测分为两个水平：即转录水平上对特异mRNA的检测和翻译水平上对特异蛋白质的检测。转录水平上的检测主要方法是Northern杂交。 RNA甲醛变性电泳 Northern杂交结果图 18sRNA 28sRNA （3）外源基因表达蛋白的检测 外源基因翻译表达的蛋白的检测方法有生化反应检测法、免疫学检测法和生物学活性的检测三种。生化反应检测法主要通过酶反应来检测。免疫学检测法是通过目的蛋白（抗原）与其抗体的特异性结合进行检测，具体方法有Western杂交、酶联免疫吸附法（ELISA）及免疫沉淀法。 （4）报告基因的酶法检测 报告基因多数是编码酶的基因，如GUS、CAT、NOS等。通过对酶活性的分析，可对基因表达水平进行定量或定位分析。同样，报告基因亦可进行DNA杂交分析或PCR扩增分析。 外源基因 Kanr 报告基因 启动子 终止子 三 基因工程的安全性评定 1. 转基因植物的风险性 植物基因工程产品在商品化的过程中会遇到许多挑战，既包括作为一个新品种所必须具备的种种特性，还包括一些与传统育种无关的挑战。 这种商品是带有一个外源基因的有机体，为保证消费者、农业系统以及环境的安全，需建立一套管理程序阻止有害的重组微生物的泄漏与重新分配。 从本质上讲，转基因植物和常规育成的品种是一样的，两者都是在原有品种的基础上对部分性状进行修饰，或增加新的性状、或消除原来的不利性状。但常规有性杂交仅限于种内或近缘种间，而转基因植物中的外源基因可来自植物、动物和微生物，人们对有可能出现的新组合、新性状是否会影响人类健康和生物环境还缺乏清楚的认识，也不能完全精确地预测一个外源基因在新的遗传背景中所产生的相互作用。 目前对转基因植物的安全性评价主要包括两方面：环境安全性和食品安全性。 （1）杂草化问题： 随着转基因植物环境释放种类增多，规模增大，在其释放后转基因植物是否会变成不可控制的杂草等问题成为人们关注的热点。 目前转基因植物的插入特性以抗除草剂的为多，其次是抗虫和抗病毒，然后是抗逆。某些植物由于导入了新的基因，而使它对亲本植物或其野生种有更强的生存能力。这类转基因植物的释放和扩散，因其过旺的生存力，会破坏自然界植物的多样性，使其本身成为杂草。 转基因植物释放后，成为杂草有三种可能：转基因植物本身成为杂草；使某种杂草变得更加难以控制；转基因植物侵入新的生态领域，破坏了生态平衡从而成为杂草。 （2）基因扩散 基因扩散主要是通过花粉、种子传播来实现的。随着世界经济与贸易的发展，转基因植物的种子可以很快从一个洲到另一个洲；从少有近缘野生种达到地区转移至大量该作物近缘野生种的区域。由此造成的转基因扩散迅速且大规模，因此国际间共同防范转基因扩散是必要的。 迄今为止，大部分转基因植物的田间释放是小规模的，再加上细致的管理，因而还没有转基因植物的释放导致严重的生态学风险或者导致对环境产生恶劣的影响的报道。然而，许多影响是长期的风险。当这些转基因植物进入市场在农业中广泛推广时，就需要