如何选配最适用的叶素荧光成像仪器.pptxVIP

如何选配最适用的叶绿素荧光成像仪器李川易科泰生态技术公司EcoLab生态实验室叶绿素荧光仪发展现状连续激发式荧光仪 Direct Fluorometer，PEA脉冲调制式荧光仪 Pulse Amplitude Modulated Fluorometer，PAM双调制式荧光仪 Double-Modulation Fluorometer，FL3500叶绿素荧光仪的局限性仅能通过光纤测量一个点的总值只能获得数据和动力学曲线图一般只能测量叶片在进行光合相关突变体筛选时工作量极大叶绿素荧光成像技术的发展Ladislav Nedbal（2000）等于上世纪90年代末期发明了与PAM技术相结合的叶绿素荧光成像技术，研制成功了第一台FluorCam调制式荧光成像仪。从此正式开启了叶绿素荧光研究的二维时代。Baker，2008，引用次数1200如何根据实验设计选择合适的叶绿素荧光成像仪器型号和配置？如何分辨叶绿素荧光成像仪器的优劣？实验设计中需要明确的问题测量什么样品室内实验还是野外实验测量哪些参数软件分析功能经费测量什么样品成像面积3.5×3.5cm13×13cm或20×20cm35×35cm20倍/40倍显微镜仪器的成像面积是怎么确定的？光源板面积为了进行可靠的叶绿素荧光成像测量，关键在于整个成像区域中保证均匀同质的光照。（Kalaji，2014）CCD传感器与镜头分辨率对焦分辨率越高越好吗分辨率与灵敏度的竞争关系高灵敏度CCD高分辨率CCD分辨率灵敏度分辨率灵敏度720 x 56050帧/秒1392 x 10401帧/秒1024 x 768 10帧/秒696 x 52025帧/秒464 x 34420帧/秒348 x 256 50帧/秒Mao，2015Fan，2015光源的选择光质：一般为红光、蓝光或白光，特殊情况下可能需要绿光、青光、棕色光等光源光强：2000 μmol?m–2?s–1的饱和脉冲可能足够进行Fm的测量，但是对于在较高的光照下测量Fm’则可能太低了（Murchie，2013）。Earl 和Ennahli（2004）在研究玉米时甚至发现 7500 μmol?m–2?s–1以上的饱和脉冲才能测得最大的Fm’。actinic lightSaturating pulse拟南芥50-1500700-4000水稻400小麦4003000大麦4000高粱2001250西红柿2500,3500小立碗藓8504000鳄梨4002000茅膏菜100内实验还是野外实验测量哪些参数叶绿素荧光参数Fv/Fm：测量参数包括F0，Fm，Fv，Fv/ Fm等Kautsky诱导效应：F0，Fp，Fv，Ft_Lss，QY，Rfd等荧光参数荧光淬灭分析：F0，Fm，Fp，Fs，Fv，Fv/ Fm，QY，ΦII，NPQ，qP，Rfd，qN，qL等光响应曲线：F0，Fm，Fv/ Fm，QY_Ln，ETR等荧光参数荧光成像可以测量OJIP吗OJIP测量对检测器的要求：100 000次/秒目前商用仪器中仅有两种可以进行OJIP荧光成像Jedmowski，2015荧光成像如何测量F0’使用公式计算 Oxborough and Baker，1997使用远红光源板直接测量 其他成像功能PAR吸收率成像GFP、YFP等荧光蛋白成像MCF多光谱荧光成像显微多光谱成像与光谱分析PAR吸收率成像植物光合有效辐射吸收率（PAR absorptivity）：通过红色光源与红外光源照射植物样品，测量植物样品对每种光源的反射率，根据公式计算得出光合有效辐射吸收率。其计算公式为：Ulstrup，2007GFP、YFP等荧光蛋白成像MCF多光谱荧光成像作物病害早期无损检测与叶绿素荧光成像技术结合共同研究Chaerle，2006Pérez-Bueno，2015FKM多光谱荧光动态显微成像技术FluorCam荧光成像技术生物荧光显微成像技术多光谱荧光测量技术光谱分析技术Berman-Frank，2001Ferimazova ，2013镉、铜、锌、铬等重金属胁迫可以严重影响植物的光合能力，FluorCam叶绿素荧光成像技术能够研究重金属对植物叶片或其他器官宏观上的伤害，而FKM技术可以直观地研究单个植物细胞里重金属积累对叶绿体的影响及不同细胞之间的差异。（Küpper，2007）忍冬叶片横切——栅栏组织和海绵组织拟南芥表面成像——细胞内的叶绿体分布表皮细胞成像——气孔与叶绿体玉米表皮细胞荧光成像叶绿素荧光的光谱分析软件基础功能光源及CCD调节自动样品识别计算参数及成像软件高级功能图像智能识别手动图像识别荧光值分级无人值守自动测量Nejad，2006Hartmut ，2013高级自定义荧光测量程序Thank You!易科泰生态技术公司Ecolab生态实验室/