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高中生物实验方法与常用试剂 发布：ykb??2012年03月01日??点击：36?? 预科部 生物组 实验是高中生物的重点也是难点，高考中对实验的考查往往是来源于课本实验而又要高于课本实验，因此对课本实验的分析和总结，往往就显得特别重要。1．实验方法 　(1)化学物质的检测方法：（检测物质的有无） ①淀粉——碘液 ②还原糖——斐林试剂、班氏试剂 ③CO2——Ca(OH)2溶液或酸碱指示剂（溴麝香草酚蓝） ④乳酸——pH试纸 ⑤O2——余烬复燃 ⑥无O2——火焰熄灭 ⑦蛋白质——双缩脲试剂 ⑧染色体——龙胆紫、醋酸洋红溶液 （碱性染料）⑨DNA——二苯胺试剂 ⑩脂肪——苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ染液 ○11亚硝酸盐——对氨基苯磺酸、N-1-萘基乙二胺盐　(2)实验结果的显示方法： ①光合速率——O2释放量或CO2吸收量或淀粉产生量 ②呼吸速率——O2吸收量或CO2释放量或淀粉减少量 ③原子途径——放射性同位素示踪法 ④细胞液浓度大小——质壁分离 ⑤细胞是否死亡——质壁分离 ⑥甲状腺激素作用——动物耗氧量，发育速度等 ⑦生长激素作用——生长速度(体重变化，身高变化) ⑧胰岛素作用——动物活动状态 ⑨菌量——菌落数或亚甲基蓝溶液褪色程度 ⑩大肠杆菌——伊红—美蓝琼脂培养基 　(3)实验条件的控制方法： ①增加水中氧气——泵入空气或吹气或放入绿色植物 ②减少水中氧气——容器密封或油膜覆盖或用凉开水 ③除去容器中CO2——NaOH溶液 ④除去叶片中原有淀粉——置于黑暗环境 ⑤除去叶片中叶绿素——酒精隔水加热 ⑥除去光合作用对呼吸作用的干扰——给植株遮光 ⑦如何得到单色光——棱镜色散或彩色薄膜滤光 ⑧血液抗凝——加入柠檬酸钠 ⑨线粒体提取——细胞匀浆离心 ⑩灭菌方法——微生物培养的关键在于灭菌，对不同材料,灭菌方法不同：培养基用高压蒸气灭菌；接种环用火焰灼烧灭菌；双手用肥皂洗净，擦干后用75％酒精消毒；整个接种过程都在实验室无菌区进行。　 　(4)实验中控制温度的方法： ①还原糖鉴定：水浴煮沸加热 ②酶促反应：水浴保温 ③用酒精溶解叶中的叶绿素：酒精要隔水加热 ④DNA的鉴定：水浴煮沸加热 ⑤细胞和组织培养以及微生物培养：恒温培养 2.生物学中常用的试剂：（1）斐林试剂： 成分：0.1g/ml NaOH（甲液）和0.05g/ml CuSO4（乙液）。用法：将斐林试剂甲液和乙液等体积混合，再将混合后的斐林试剂倒入待测液，水浴加热或直接加热，如待测液中存在还原糖，则呈砖红色。? （2）班氏糖定性试剂：为蓝色溶液。和葡萄糖混合后沸水浴会出现砖红色沉淀。用于尿糖的测定。? （3）双缩脲试剂：成分：0.1g/ml NaOH（甲液）和0.01g/ml CuSO4（乙液）。用法：向待测液中先加入2ml甲液，摇匀，再向其中加入3~4滴乙液，摇匀。如待测中存在蛋白质，则呈现紫色。? （4）苏丹Ⅲ：用法：取苏丹Ⅲ颗粒溶于95%的酒精中，摇匀。用于检测脂肪。可将脂肪染成橘黄色（被苏丹Ⅳ染成红色）。? （5）二苯胺：用于鉴定DNA。DNA遇二苯胺（沸水浴）会被染成蓝色。? （6）甲基绿：用于鉴定DNA。DNA遇甲基绿（常温）会被染成蓝绿色。（甲基绿使DNA呈现绿色，吡罗红使RNA呈现红色。） （7）50%的酒精溶液：在脂肪鉴定中，用苏丹Ⅲ染液染色，再用50%的酒精溶液洗去浮色。 （8）75%的酒精溶液：用于杀菌消毒，75%的酒精能渗入细胞内，使蛋白质凝固变性。低于这个浓度，酒精的渗透脱水作用减弱，杀菌力不强；而高于这个浓度，则会使细菌表面蛋白质迅速脱水，凝固成膜，妨碍酒精透入，削弱杀菌能力。75％的酒精溶液常用于手术前、打针、换药、针灸前皮肤脱碘消毒以及机械消毒等。 （9）95%的酒精溶液：冷却的体积分数为95%的酒精可用于凝集DNA。? （10）①在解离液配制中，15%的盐酸和95%的酒精溶液等体积混合可用于解离根尖。②在观察细胞中DNA和RNA在细胞中分布的实验中，用于杀死细胞，改变细胞膜的通透性，使有利于染色。? （11）龙胆紫溶液：(浓度为0.01g/ml或0.02g/ml)用于染色体着色，可将染色体染成紫色，通常染色3~5分钟。（也可以用醋酸洋红染色）。 （12）澄清石灰石：鉴定二氧化碳的存在，反应时溶液变浑浊。 （13）溴麝香草酚蓝：鉴定二氧化碳的存在，中性是为蓝色，遇二氧化碳时呈黄色。（14）重铬酸钾：鉴定酒精的存在，在酸性条件下，与酒精反应呈灰绿色。（15）碘液：用于鉴定淀粉的存在。遇淀粉变蓝。? （16）丙酮：用于提取叶绿体中的色素。? （17）层析液：（成分：20份石油醚、2份丙酮、和1份苯混合而成，也可用93号汽油）可用于色素的层析，即