ZBTB8A论文：ZBTB蛋白家族成员—ZBTB8A生物学功能初探.docVIP

ZBTB8A论文：ZBTB蛋白家族成员—ZBTB8A的生物学功能初探 【中文摘要】ZBTB蛋白是C2H2型锌指蛋白家族的重要成员,作为转录因子调节下游靶基因的转录活性,广泛的参与基因的转录调控,细胞增殖、分化及凋亡等生命活动。本实验室通过RT-PCR从胃癌细胞AGS中克隆到一个ZBTB家族基因ZBTB8A （Zinc finger and BTB domain containing 8A）。目前未见关于ZBTB8A的文献报道,故本文对该基因展开了初步的探索。生物信息学分析表明,ZBTB8A（NM001040441）位于第1号染色体,定位在1p35.1。该基因含有1326bp开放阅读框,编码一个由441个氨基酸组成,分子量为50KD的蛋白。SMART分析表明ZBTB8A蛋白N端含有一个BTB结构域,C端含有两个典型的C2H2型锌指基序。同源性分析显示该蛋白BTB结构域和多个ZBTB家族成员的BTB结构域是高度同源的。通过构建绿色荧光蛋白融合表达载体pEGFP -ZBTB8A进行亚细胞定位分析,结果显示ZBTB8A定位于细胞核且呈斑点状分布。为鉴定ZBTB8A蛋白的不同结构域对定位的影响,构建了一系列截短型ZBTB8A与绿色荧光蛋白融合表达的重组质粒,转染HeLa细胞进行亚细胞定位分析。结果显示锌指结构域对ZBTB8A蛋白的细胞核定位起关键作用,而BTB结构域对于ZBTB8A在细胞核内的斑点状定位是必需的。大量研究表明ZBTB蛋白作为转录因子参与细胞内多种信号通路的转导。因此,本文首先应用pGal45tkLuc报告载体分析ZBTB8A的转录激活/抑制作用,数据表明ZBTB8A是一个转录抑制因子。其次利用一系列信号通路报告载体,通过双荧光素酶报告基因检测系统分析ZBTB8A对AP1, NFAT, MYC, Rb, HSE, CRE, AP1（PMA）, GRE和NF-κB相关信号通路的转录调控作用。结果表明ZBTB8A蛋白明显抑制CRE的转录活性,且该抑制作用具有剂量依赖性。进一步对ZBTB8A的不同功能区段的转录调控作用进行分析,数据表明BTB结构域及锌指结构域在ZBTB8A对CRE的转录抑制中都是非常重要的,缺失其中任一结构域都会显著降低该抑制作用。pCRE-Luc质粒含有CRE元件,用来监控CRE介导的信号通路,说明ZBTB8A可能在CRE介导的信号通路中发挥一定的抑制作用从而调控细胞的一系列功能。为进一步开展对ZBTB8A功能的研究,我们设计并合成四个ZBTB8A干扰载体。应用半定量PCR鉴定出有效的ZBTB8A干扰载体,并通过G418筛选获得高表达及低表达ZBTB8A的AGS稳定细胞株。本实验的相关工作为深入研究ZBTB8A在胃癌细胞AGS中的生物学作用,确定ZBTB8A在肿瘤细胞中的功能打下了基础。 【英文摘要】The ZBTB proteins which are important member of the zinc finger protein family that function as transcription factors play important roles in various cellular functions, such as transcriptional regulation, cell proliferation, differentiation and apoptosis. Firstly, we cloned a gene , named as ZBTB8A which is a member of human ZBTB family, from gastric cancer cell AGS cDNA by RT-PCR. Since there are no reports on ZBTB8A, we carry out preliminary exploration on this gene.Bioinformatics databases were used to analyze and predict its structure and function. Results showed that ZBTB8A（NM001040441） gene has a full open reading frame （ORF） of 1326bp, which was localized on chromosome 1p35.1. The ZBTB8A gene encodes a protein with 441 amino acids. The molecular weight is predicted to be 50 kDa. SMART analysis showed