电动力辅助板框式压滤机进行都下水污泥脱水之研究课件.pptVIP

不同迴流流速操作條件下厭氧氨氧化反 應效能與菌相變化之研究 摘要 厭氧氨氧化反應(Anammox, Anaerobic Ammonia Oxidation)為將氨氮(NH4+)及亞硝酸氮(NO2-)直接反應生成氮氣(N2)。此反應具有不需添加碳源與曝氣、污泥產量低等諸多優點。由於操作條件如反應槽上升流速等對於系統效能有直接之影響，因此本研究設計厭氧氨氧化批次反應槽，控制不同的污泥迴流流速，分別為0 ml/min、10 ml/min、100 ml/min，利用可區分菌種活性之藥品Propidiummonoazide (PMA)和聚合酶鏈鎖反應-變性梯度凝膠電泳(PCR-DGGE)等分子生物技術以及水質分析方法，探討不同污泥迴流流速條件下其系統具活性之厭氧氨氧化菌群結構變化和除氮效能間的關係。 一、 前言  由於都市快速發展，使得部分工業廢水、家庭廢水未經適當處理即排入天然水域中，導致環境中氨氮濃度逐漸增加，可能會降低水中溶氧及影響水質的安全衛生，進一步對原有的自然環境生態造成破壞，故近年來國內環保單位正討論並草擬更嚴格的放流水標準以保護生態平衡。目前有許多研究以發展出多種去除含氮污染物的處理程序，其中的生物處理法仍是處理含氨氮廢污水最經濟的方法之一。 近年研究發現，特殊的自營性微生物可於無氧環境下，利用二氧化碳(CO2)作為碳源，將氨氮(NH4+)與亞硝酸根離子(NO2-)反應直接轉化生成氮氣(N2)(Jettenet al., 2001) ，此除氮機制即所謂的厭氧氨氧化反應(Anaerobic AmmoniaOxidation, Anammox)，其化學方程式為NH4+ + NO2- →N2 + 2H2O。此程序有別於一般傳統硝化結合脫硝程序系統，具有不需添加碳源、污泥產量低以及不需額外曝氣節省能源消耗等諸多優點；此外，其應用範圍廣泛，包含工業製程廢水、畜牧業廢水以及掩埋場滲出水等。 二、 實驗材料與方法  1. 樣本來源 本研究取自於工業技術研究院所架設不同污泥迴流流速之厭氧氨氧化系統中污泥樣本。取適量之污泥以10000rpm 離心1 分鐘以收集污泥沉澱物(pellet)並去除上澄液，利用1×PBS 再懸浮並以10000rpm 離心1 分鐘，重複上述步驟以清洗pellet。 2. Propidium Monoazide (PMA)處理 將PMA 溶於20 % dimethyl sulfoxide，濃度配置為20 mM，將2.5 μL PMA加入500 μL 的樣本並放置於暗處5 min，之後將樣本置於冰上並開啟650W 的鹵素燈照射樣本2~4 min，再以10000rpm 離心2 分鐘(Nocker et al., 2009)。 3. DNA 萃取及聚合酶鏈鎖反應 將樣本利用商用試劑UltraCleanTM Soil DNA Isolation Kit (Mo Bio, USA)進行DNA 萃取。將萃取後之DNA 進行PCR 增幅，本研究將使用之引子為針對厭氧氨氧化菌之PLA46f 及Amx368r 與針對氨氧化菌之amoA gene 引子對(1F vs2R)，其相關實驗條件如文獻所示(Neef et al., 1998；Schmid et al., 2003)以及(Rotthauwe et al., 1997)。將PCR 增幅後之產物，利用1.5%之瓊脂膠糖明膠進行電泳(Agarose gel)分析，再以Safe ViewerTM Nucleic Acid Stain 染色30 分鐘並以紫外光顯像。 4. 變性梯度凝膠電泳分析及DNA 純化 本研究使用之DGGE 膠體為6 % (wt/vol) acrylamide/bis，變性梯度範圍為30% ~ 55 %分析以PCR 所增幅針對Anammox 族群之產物。利用變性梯度凝膠電泳槽(Dcode gene System, Bio-Rad)，以80 伏特電壓及60 ℃條件下進行電泳12 小時，最後利用Safe ViewerTM Nucleic Acid Stain 進行核酸染色，並以紫外光顯像。PCR-DGGE 分析後，將膠體上相異的亮帶分別切下後置於無菌水中，經過冷凍-解凍過程獲取目標DNA 片段；並重複進行PCR-DGGE 與切膠純化的分析直至確定為單一亮帶為止。 5. 水質分析 系統水質監測部份，由工研院每週監測進出流水之NH4+-N、NO2--N、與NO3--N ， 其分析方式為利用離子層析儀（ Ion Chromatography, IC ， 型號DioNEX-DX100，陰離子分析管柱AS-4A，流洗液為NaCO3 與NaHCO3；陽離子分析管柱CS-15、流洗液為H2