饲料发酵工对益生菌增殖及大肠杆菌数量变化影响.docVIP

饲料发酵工艺对益生菌增殖及大肠杆菌数量变化的影响 摘 要：以植物乳杆菌和大肠杆菌 E.colik88 为指示菌株，研究了饲料的液态转固态发酵与固态发酵两种工艺在 20 ℃与 30 ℃两种温度下的 pH 值变化及菌数的动态变化。结果表明：①30 ℃温度下，物料的酸度变化（pH 值）比 20 ℃温度时下降的速度快、幅度大；②在固态发酵过程中，液态转固态发酵的起始 pH 值低于固态发酵（P＜0.05），但液态转固态发酵和固态发酵在发酵过程中 pH 值差异不显著(P＞0.05)；③在 30 ℃的发酵温度下，乳酸细菌数呈先增值后下降趋势，但液态转固态发酵与固态发酵之间差异不显著(P＞0.05)；④在液态转固态发酵工艺下，大肠杆菌 E.colik88 菌数呈直线下降趋势，而在固态发酵工艺下，大肠杆菌 E.colik88 菌数呈先升后降，证实液态转固态工艺对原料中大肠杆菌直接产生抑菌作用。 关键词：益生菌；发酵工艺；乳酸菌数；抑菌特性 随着饲料中抗生素类生长促进剂在欧盟的全面 禁用，饲料微生物发酵技术在动物生产中受到高度重 视，欧盟已实现广泛应用。饲喂微生物发酵饲料有提 高动物生长性能和改善肠道健康的作用（Scholten 等， 1999；Canibe 等 2007），荷兰至少有 50％的猪在饲喂 发酵饲料，丹麦有 30％以上的母猪饲喂发酵饲料，母 猪泌乳期的使用更达 70%以上。另外，法国、瑞典、西 班牙也陆续开始使用微生物发酵饲料。饲料发酵目前 主要采用液态发酵和固态发酵两种工艺，液态发酵 （Submerged Fermentation,SmF）具有周期短、易控制、 微生物的繁殖重复性强等优点，但需要配套昂贵的系 统设备，难以被大众所接受；固态发酵（Solid State Fermentation,SSF）具有培养基简单，基料来源广泛；投 资少，能耗低，操作方便等优点，但劳动强度大，难以 与现实规模化养殖生产所需的系列化日粮配合加工 结合。为此，本课题设计饲料液态发酵转固态发酵新 工艺并展开了系列研究。试验以植物乳杆菌（Lacto－ bacillus plantarum） 和致病性大肠杆菌 E.colik88 为指 示菌株，研究在液态转固态发酵饲料中目标益生菌和 指示菌的动态变化情况，为建立适合我国养殖生产条 件的生物发酵饲料新工艺提供科学依据。 1 材料与方法 1.1 试验材料 1.1.1 菌株来源 植物乳杆菌由湖北省农业科学院畜牧兽医研究 所分离、鉴定并保存；大肠杆菌 E.colik88 购于中国兽 医药品监察所。 1.1.2 培养基选择及菌株培养 参照何涛等介绍的方法，植物乳杆菌采用 MRS 培养基，大肠杆菌 E.colik88 采用伊红美兰培养基培养。 1.1.3 主要仪器设备 超净工作台（苏州安泰 SW-CJ-1CU 型）、酸度计 (上海理达 PHS-25C 型)、高压蒸汽灭菌锅（上海申安 ZDX-35BI 型）、恒温培养箱 （黄石恒丰 SP-01 型）、 微型发酵瓶(罐头瓶)。 1.1.4 发酵基料设计原则 以生长后期仔猪配合饲料为发酵的基础原料，即 不含预混料的配合饲料（配方见表 1）。在此基础上， 制备如下三种发酵基料，①固态发酵基料：为不含微 量元素、维生素、矿物质的配合饲料；②液态发酵基 料：玉米、豆粕按质量分数 1： 3 混合均匀；③液态转 固态发酵基料：为固态发酵基料中减去液态发酵基料 的部分。 《饲料工业》·2011 年第 32 卷第 5 期 试 验 研 究 30表 1 固态发酵基料配方 原料名称 玉米 豆粕 鱼粉 麸皮 膨化大豆 比例（%） 66 18 3 5 8 1.2 试验方法 1.2.1 试验设计与方案 采用 2 因子试验设计。研究了2 种发酵温度（20 ℃， T1；30 ℃，T2）下，不同发酵工艺（液态转固态发酵和固 态发酵）对 pH 值及菌落数的影响，设计方案见表 2。 表 2 设计方案 发酵温度 T1（20℃） T2（30℃） 发酵工艺 液态转固态发酵 固态发酵 液态转固态发酵 固态发酵 1.2.2 试验操作方法 液态转固态发酵工艺操作方法 第一阶段（液态发酵）：称取 20 g 液态发酵基料 于微型发酵瓶中，以料水比 1： 3.5 加入 70 g 水，按 10 6 cfu/g 物料接入植物乳杆菌，在 25 ℃的恒温条件下 静置培养 48 h。 第二阶段（固态发酵）：直接在液态发酵料中加入 80 g 的固态配合料，搅拌均匀，使终水分在 40%左右。 并按每 10 6 cfu/g 物料接种 E.colik88，密封置恒温培养 箱中培养。 固态发酵工艺操作方法 与液态转固态发酵工艺的第二个阶段同时进行， 具体操作如下：称取 20 g 液态发酵基料和 80 g 的固 态配合料于微型发酵瓶中，加入一定质