第四章金黄色葡萄球菌检验课件.pptVIP

第六章 金黄色葡萄球菌检验 一、教学目的：了解检验食品中金黄色葡萄球菌的意义；了解金黄色葡萄球菌的形态、染色、培养特性与抵抗力；掌握金黄色葡萄球菌的检验方法及检验程序。 二、教学重点及难点：金黄色葡萄球菌的形态、染色、培养特性；金黄色葡萄球菌的检验方法及检验程序。 一、生物学特性 1、形态与染色：典型的金黄色葡萄球菌为球型，直径0.8μm左右，显微镜下排列成葡萄串状。金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜，革兰氏染色阳性。 二、金黄色葡萄球菌的流行病学 金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在，近年来，美国疾病控制中心报告，由金黄色葡萄球菌引起的感染仅次于大肠杆菌。美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒占整个细菌性食物中毒的33%，加拿大则更多，占45%，我国每年发生的此类中毒事件也非常多。日本雪印牛奶。 金黄色葡萄球菌的流行病多见于春夏季；中毒食品种类多，如奶、肉、蛋、鱼及其制品。此外，剩饭、油煎蛋、糯米糕及凉粉等引起的中毒事件也有报道。上呼吸道感染患者鼻腔带菌率83%，所以人畜化脓性感染部位常成为污染源。 污染途径：食品加工人员、炊事员或销售人员带菌，造成食品污染；食品在加工前本身带菌，或在加工过程中受到了污染，产生了肠毒素，引起食物中毒； 肠毒素形成条件：存放温度，在37°C内，温度越高，产毒时间越短；存放地点，通风不良氧分压低易形成肠毒素；食物种类，含蛋白质丰富，水分多，同时含一定量淀粉的食物，肠毒素易生成。 三、金黄色葡萄球菌的致病性 1、金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌，可引起局部化脓感染，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染。　 四、金黄色葡萄球菌的检验 1．金黄色葡萄球菌的检验 样品处理：无菌取25g或25mL食品样品，放入225mL灭菌生理盐水中均质，制成1∶10稀释液。 增菌培养：将1∶10稀释液接入7.5%NaCl肉汤或胰蛋白胨肉汤中，37°C培养24小时。 分离培养：将上述稀释液或培养液分别划线血平板和Baird-Parker平板，置37°C培养24-48小时。金黄色葡萄球菌在血平板上呈金黄或白色菌落，大而凸起，表面光滑，周围有溶血圈。在Baird-Parker平板上菌落为圆形，直径2-3mm，颜色灰或黑色，周围有一浑浊带。 染色观察：从平板上挑取可疑性菌落进行革兰氏染色，金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性，显微镜下呈葡萄状排列无芽胞、荚膜，直径0.5-1μm。 五、MPN方法 这种方法适用于检测认为带有大量竞争菌的食品及其原料和未经处理的食品中的少量金黄色 葡萄球菌。 1、样品制备： 　　固体或半固体食品: 以无菌操作称取25g样品,放入装有225mL灭菌生理盐水的灭菌均 质杯内,于8000r/min均质1～2min,制成1:10样品匀液。 　　液体食品: 用灭菌吸管吸取25mL样品,放入装有225mL灭菌生理盐水的灭菌玻璃瓶内 (瓶内预置适当数量的玻璃珠),经充分振摇制成1:10样品匀液。 　　供计数检验时,可按十进位递增稀释法将样品匀液再进行适当稀释。 2、选三个连续稀释度，从每个稀释度分别取1 mL稀释样品液，接种3管含10％氯化钠。（金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在10-15%NaCl肉汤中生长。 因此，这事实上是一种选择性的增菌。）胰蛋白胨大豆肉汤。样品的最高稀释度必须达到能获得阴性终点,置36±1℃培养48 h。 * * 革兰氏染色阳性 显微照片 扫描电镜照片 2、培养特性： 金黄色葡萄球菌营养要求不高，在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧，最适生长温度37°C，最适生长pH 7.4。 平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起，直径1-2mm。血平板菌落周围形成透明的溶血环。 金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在10-15%NaCl肉汤中生长。 甘露醇盐平板上的 菌落 血平板上的 菌落 3、生化特性： 可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气。甲基红反应阳性，VP反应弱阳性。 许多菌株可分解精氨酸，水解尿素，还原硝酸盐，液化明胶。 金黄色葡萄球菌具有较强的抵抗力，对磺胺类药物敏感性低，但对青霉素、红霉素等高度敏感。 革兰氏染色显微镜照片 BP平板上的菌落形态 灰黑色至黑色,有光泽,常有浅色(非白色)的边缘,周围绕以不透明圈 (沉淀),其外常有一清晰带。 2、金黄色葡萄球菌的致病力强弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶： 　　a.溶血毒素：外毒素，分α、β、γ、δ四种，能损伤血小板，破坏溶酶体，引起肌体局部缺血和坏死； 　　b.杀白细胞素：可破坏人的白细胞和巨噬细胞； 　　c.血浆凝固酶：当金黄色葡萄球菌侵入人体时，该酶使血液或血浆中的纤维蛋白沉积于菌体表面或凝固，阻碍吞噬细胞的吞噬作用。葡萄球菌形成的感染易局部化与此酶有关；　 下颚