色谱分析法第八章 高效液相色谱装置和实验技术.pptx

1 第八章　 高效液相色谱装置与实验技术  2 8.1高效液相色谱装置 高效液相色谱具有柱效高、分析速度快、流动相和被测组分的体积流量很小等特点。这些特征要求高效液相色谱的仪器系统死体积要小，并能承受足够的压力。经过30年的努力，目前许多商品仪器都具有这种性能。仪器操作和样品分析结果的处理完全由计算机编程执行。在仪器出现故障时，可通过仪器的自检系统提供有用的信息。本节的目的不是详述目前国内外的商品仪器，而在于介绍实现高效液相色谱分离分析过程所必须的装置，以及它们工作的最基本、最简单的原理。 8.1.1色谱系统 图8.1是高效液相色谱系统的方框图，它由以输液泵为核心的输液系统、进样器、柱子和检测器四个基本部分所组成。 3 图8.1 高效液相色系统的方程图 8.1.2输液系统 输液系统的作用是向柱子提供压力高，流速稳定的流动相。它以高压输液泵为核心，由溶剂储槽、过滤器、输液泵、梯度溶剂混合器、阻尼器等组成。为了实施系统流量或压力的测量、或程序控制，在输液系统的输出通路上还安装不同类型的传感元件。 4 １）储液槽 ２）过滤器 ３）高压输液泵 图8.2 气动放大泵结构示意图 5 （１）气动放大泵 （２）往复泵 图8.3 往复泵结构示意图 （３）螺旋柱塞泵 螺旋柱塞泵和往复泵的原理完全不同，电机以一定的转速通过螺杆的旋转驱动柱塞上下移动。柱塞向下移动时，将液体吸入缸内，一次吸入数十毫升，可快速进行。柱塞向上移动时将液体排出。 6 图8.4 螺旋柱塞泵结构示意图 ４）阻尼器 阻尼器也称缓冲器，是为减少流量波动而设置的，它安装于溶剂系统中。因为流量的脉动引起基线和检测信号的噪音及检测限。最简单的脉动阻尼器是一根比较长，但内径很细的不锈钢毛细管。把它固定于一个组件中便于安装。 7 8.1.3梯度洗脱装置 当样品是一个含有不同种类组分的复杂混合物时，通常用一种纯的或固定组成的混合溶剂难以实现满意的分离。 图8.5 最佳线性溶剂强度梯度分离的例示 8 １）低压梯度 图8.6 低压溶剂梯度方框图 图8.7 用两个高压泵组成的 高压溶剂梯度方框图 9 ２）高压梯度 8.1.4进样装置 在液相色谱中，进样方式有微量注射器进样，进样阀进样，自动进样等。在微柱液相色谱技术中也采用各种分流的进样方法，在特殊的色谱过程还使用预柱进样，等等。 图8.8 使用注射器装载样品的六通阀进样器 10 8.1.5检测器 １）概述 （１）分类 （２）对检测器的要求 ① 具有高的灵敏度 ② 对所有的溶质都有响应 ③ 线性范围宽 ④ 低噪声和低基线漂移 ⑤ 死体积小，避免谱带发生再混合 ⑥ 响应快 ⑦ 对溶剂改变、流速和温度变化不敏感 ⑧ 不破坏样品 ⑨ 操作简便，易于维修等。 11 （３）检测器的特性 ２）检测器的类型 （１）紫外、可见紫外分光检测器 图8.9 单波长紫外检测器 图8.10 可变波长检测器光路图 12 图8.11 （２）示差折光检测器 图8.12 凝胶渗透色谱血清分析得到的 血清蛋白的三元分光色谱图 13 图8.13 弗列斯涅耳折光指数检测器 图8.14 弗列斯涅耳检测器池部件的截面图 14 图8.15 偏转折光指数检测器 图8.16 干涉计折光指数检测器 15 3）荧光检测器 图8.17 荧光检测器光路图 16 （４）电化学检测器 ①电导检测器 ②电流和电量检测器 图8.18 薄层电流计检测器 图8.19 铂管电极库仑计检测器 17 ３）各种检测器特性的比较 8.2高效液相色谱-质谱联用技术 液相色谱-质谱(Liquid ChromatographyMass Spectrometry，LCMS)联用技术的研究开始于20世纪70年代，与GC-MS联用技术不同的是液相色谱质谱联用技术经历了一个更长的实践、研究过程，直到20世纪90年代才出现了被广泛接受的商品接口及成套仪器。 8.2.1液相色谱-质谱联用的接口 １）直接液体导入接口 ２）移动带技术 ３）热喷雾接口 ４）粒子束接口 ５）快原子轰击 18 ６）激光解吸离子化和基质辅助激光解吸离子化 ７）电喷雾电离 （１）高的离子化效率 （２）多种离子化模式供选择 （３）对蛋白质而言，稳定的多电荷离子产生使蛋白质分子量测定范围可高达几十万甚至上百万ｕ； （４）“软”离子化方式使热不稳定化合物得以分析并产生高丰度的准分子离子峰； （５）气动辅助电喷雾(pneumaticassisted electrospray) （６）仪器专用化学站的开发使得仪器在调试、操作、HPLCMS联机控制、故障自诊断等各方面都变得简单可靠。 ８）多种电喷雾接口技