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微生物学检验其他革兰阴性杆菌及检验课件
其他革兰阴性杆菌的常规检验 嗜血杆菌属 嗜肺军团菌属 布鲁菌 百日咳鲍特菌 弯曲菌 幽门螺杆菌 流感嗜血杆菌 G-小杆菌,多形性 有毒菌株形成荚膜 培养基中需加入血液,以提供X因子和V因子(巧克力色培养基) X因子--血红素 V因子--辅酶Ⅰ或辅酶Ⅱ 菌落光滑、无色透明、露滴状 CO2培养 “卫星现象” 卫星现象 流感嗜血杆菌与金黄色葡萄球菌在血平板上共同孵育时,由于后者能合成较多的V因子,在金黄色葡萄球菌菌落周围生长的流感嗜血杆菌的菌落较大,离金黄色葡萄球菌菌落越远的越小。 根据荚膜抗原分ABCDEF六型,B型毒力最强 可产生自溶酶 致病物质:荚膜、菌毛、内毒素、 IgA蛋白酶 所致疾病 原发感染:脑膜炎、鼻咽炎等,多见于儿童 继发感染:鼻窦炎等,多见于成人 微生物学检查 鉴定依据 革兰阴性小杆菌、多形性 培养采用巧克力色培养基,CO2培养 血平板上有“卫星现象” X、V因子需求试验 军团菌 是引起军团菌病的病原体 首发于1976年的美国一次军人聚会,故称作军团病 1982年,在我国南京首次证实了军团菌病。 形态染色 革兰阴性,但不易被着色 杆菌,形态有多形性 Gimenen染色,菌体呈红色,背景为绿色 不形成芽孢,无荚膜 , 有端生或侧生鞭毛 培养特性 营养要求高 专性需氧 需2.5~5%CO2 生长缓慢 常用培养基及菌落特征 BCYE培养基:灰白色、圆形光滑湿润菌落 F-G培养基:针尖大小、黄色荧光 军团菌菌落形态(CYE琼脂培养基) 抗原结构 O抗原:具有型特异性 军团菌病约90%的是由嗜肺军团菌所致,已发现15个血清型 ,其中以Lp1血清型最常见, Lp6次之。 抵抗力 分布广泛、抵抗力强 水中存活时间长 军团菌病的主要污染源是供水系统及冷却塔和空调系统 定期清洗空调 预防军团菌病 临床意义 致病物质:内毒素、外毒素、侵袭性酶 传染途径:呼吸道(吸入含有军团菌的气溶胶) 所致疾病:军团菌病 肺炎型 非肺炎型(类似感冒) 免疫性:感染者血清中出现特异性IgG、 IgM抗体 微生物学检查 血清学试验 检测指标:检测患者血清中特异性抗体 方法:ELISA 意义: 检测特异性IgM:诊断军团菌病 检测特异性IgG:军团菌病流行病学调查 布鲁菌属 引起布鲁菌病(波状热) 可引起人畜共患病 我国流行菌种主要是羊、牛、猪布鲁菌,以羊布鲁菌最常见 属细胞被寄生菌 形态染色 革兰阴性球杆菌 光滑型有微荚膜,无芽孢,无鞭毛 常用染色法: 改良Ziehl-Neelsen染色法:菌体红色,背景为蓝色 柯兹洛夫斯基染色法:菌体红色,背景绿色 培养特性 专性需氧、5%~10%CO2 营养要求高,常用肝浸液培养基 生长缓慢 菌落细小、无色透明、光滑 生化反应 氧化酶、触酶:+ 氧化分解葡萄糖 产生硫化氢 革兰阳性需氧或兼性厌氧杆菌 白喉棒状杆菌 属棒状杆菌属 是引起白喉的病原体 主要以外毒素致病 白喉棒状杆菌--形态染色 革兰阳性细长、棒状杆菌,无芽孢,无荚膜、无芽孢 排列不规则 胞浆中有易染颗粒(重要形态学特征) 异染颗粒染色法: 阿伯脱然色 奈瑟染色 白喉棒状杆菌--培养特性 需氧或兼性厌氧 营养要求高 菌落特征 ●血平板:灰白、狭窄溶血环 ●鸡蛋斜面和血清斜面:生长迅速,灰白色有光泽菌落 ●亚碲酸钾血平板:为选择培养基,菌落 呈黑色。菌落分为重型、轻型或中间型 白喉棒状杆菌--生化反应和抗原结构 生化反应 分解葡萄糖、麦芽糖、果糖等 不分解乳糖、多数不分解蔗糖 靛基质试验-、明胶液化-、尿素分解- 抗原构造 K抗原:型特异性抗原,不耐热 O抗原:与分枝杆菌、奴卡菌有共同抗原 白喉棒状杆菌--临床意义 致病物质:白喉外毒素 由携带β-棒状杆菌噬菌体的白喉杆菌产生。 抑制蛋白质的合成。 经呼吸道飞沫感染,引起白喉。 假膜脱落阻塞呼吸道是白喉早期死亡的主要原因 中毒性心肌炎是白喉晚期死亡的主要原因 抗白喉免疫主要依靠白喉抗毒素的中和作用 锡克试验用于检测机体有无白喉抗毒素免疫 白喉棒状杆菌--检验程序 白喉棒状杆菌--标本采集和检查方法 咽拭标本 标本直接涂片 革兰染色:观察形态、染色性 异染颗粒染色:观察异染颗粒 初步报告:检出形似白喉棒状杆菌 分离培养 吕氏斜面:生长迅速,涂片镜检异染颗粒明显 亚碲酸钾血平板:黑色菌落 白喉棒状杆菌--毒力试验 意义:是鉴定白喉杆菌为致病菌株的重要依据 方法 艾立克平板毒力试验 对流电泳法
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