精制银翘解毒片中对乙酰氨基酚含量测定.docVIP

精制银翘解毒片中对乙酰氨基酚含量测定 　　摘要：建立了精制银翘解毒片中对乙酰氨基酚含量的HPLC检测方法。采用Kromasil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），以甲醇—水—冰乙酸（体积比为20∶80∶0.5）为流动相，流速为1 mL/min，检测波长为249 nm，进样量10 μL，外标法定量，结果显示，该法专属性好、简便、快速、准确、重现性好，适合于精制银翘解毒片的质量分析。对乙酰氨基酚在0.016 26～0.081 30 mg/mL的范围内峰面积与测定浓度呈良好的线性关系，R2=0.999 9（n=5），平均回收率为96.2%，RSD为8.0%（n=9）。 　　关键词：HPLC；精制银翘解毒片；对乙酰氨基酚；测定 　　中图分类号：R969.1；TS255.36 文献标识码：A 文章编号：0439—8114（2012）19—4358—03 　　精制银翘解毒片收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第三册[1]，是由对乙酰氨基酚、桔梗、连翘、淡豆豉、甘草、淡竹叶、金银花、牛蒡子、荆芥穗、薄荷脑等组成的复方制剂，现行标准中对乙酰氨基酚的含量测定采用丙酮提取后蒸干，再用无水乙醇溶解，用紫外分光光度计测定，此方法由于操作繁琐、时间长、所用试剂挥发性较大，造成测定误差较大。为了保证测定结果的准确性，根据现行药品质量标准和大量试验的基础上，对精制银翘解毒片中对乙酰氨基酚含量的测定方法进行了改进。 　　1 材料与方法 　　1.1 仪器 　　高效液相色谱仪（威玛龙LC9000）。 　　1.2 材料 　　对乙酰氨基酚（中国药品生物制品检定所，批号为100018—200408，供含量测定用）；精制银翘解毒片（广西大力神制药股份有限公司提供，批号为100601）；甲醇（色谱纯，天津四友）；水为重蒸馏水；冰乙酸（分析纯）。 　　1.3 试验方法 　　1.3.1 色谱条件 色谱柱选用杭州环球色谱科技有限公司的C18（AP）色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为甲醇—水—冰乙酸（体积比为20∶80∶0.5）；流速为1 mL/min；检测波长为249 nm[2]；进样量为10 μL。在该色谱条件下，对乙酰氨基酚峰形良好，前、后均无杂峰影响。 　　考虑到样品溶剂对色谱的干扰，根据《中国药典》附录中样品溶剂宜尽量采用流动相作溶剂的要求[1，3]，采用本方法的流动相作为溶剂，而且经试验证明该溶剂在该色谱条件下无干扰。 　　1.3.2 专属性试验（空白试验） 按处方制成不含对乙酰氨基酚的样品，按上述方法进行测定，结果表明在对乙酰氨基酚出峰处无吸收峰出现。 　　2 结果与分析 　　2.1 线性关系与范围考察 　　称取对乙酰氨基酚对照品8.13 mg，置100 mL容量瓶中加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，得到浓度为0.081 3 mg/mL的对照品溶液。精密量取5.0、10.0、12.5、20.0、25.0 mL上述溶液分别置于25 mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，分别进样10 μL，记录峰面积。以对乙酰氨基酚的峰面积（y）对进样量（x）进行线性回归，得回归方程为：y=5×107x—15 956，R2=0.999 9（n=5）。测定结果（表1）表明，在0.016 26～0.081 30 mg/mL的范围内峰面积与测定浓度呈良好的线性关系。 　　2.2 重复性试验结果 　　取同一批号样品（批号：100 601）6份，按含量测定项下方法制备供试品溶液，在上述色谱条件下，测定对乙酰氨基酚的含量，结果显示方法重复性良好，结果见表2。 　　2.3 精密度试验结果 　　取对照品溶液（浓度为0.040 65 mg/mL）10 μL，连续进样6次，测定对乙酰氨基酚的峰面积，结果显示方法精密度良好，结果见表3。 　　2.4 稳定性试验结果 　　取对照品溶液（0.040 65 mg/mL），于0、2、4、8、12 h分别进样，依法测定对乙酰氨基酚峰面积值，结果显示，溶液至少在12 h内是稳定的。结果见表4。 　　2.5 加标回收试验结果 　　精密称取已知含量的同一批供试品（批号：100 601，含量为100.4%）3份，各精密加入一定量的对乙酰氨基酚对照品，研磨均匀后精密称取3份做平行试验，计算加样回收率。测定结果（表5）较好。 　　3 小结与讨论 　　为了保证药品的质量，准确对对乙酰氨基酚的含量进行监控，本研究在参考有关报道和大量试验的基础上，对精制银翘解毒片中含量测定方法进行改进。确定最佳条件为：采用Kromasil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），以甲醇—水—冰乙酸（体积比为20∶80∶0.5）为流动相，流速为1 mL/min，检测波长为249 nm， 进样量为10 μL，以外标法测定含量，对乙酰氨基酚在0.016 26～