CCK8剂盒说明书.docVIP

Cell Counting Kit（CCK试剂盒） 目录号 产品名称 规格 包装 025 Cell Counting Kit 100次 1mL 026 Cell Counting Kit 500次 5mL 027 Cell Counting Kit 1000次 10mL 028 Cell Counting Kit 3000次 30mL 产品简介： Cell Counting Kit简称CCK 试剂盒，为MTT法的替代方法，是一种基于WST（水溶性四唑盐，化学名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐）的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。 CCK法与其它检测方法之间的比较： 细胞计数方法 MTT法 XTT法 WST-1法 CCK法 形成的formazan的水溶性 差 好 好 好 产品性状 粉末 2瓶溶液 溶液 1瓶溶液 使用方法 配成溶液后使用 现配现用 无需预制 无需预制 检测灵敏度 高 很高 很高 高 检测时间 较长 较短 较短 最短 检测波长 560-600nm 420-480nm 420-480nm 430-490nm 细胞毒性 高，细胞形态完全消失 很低，细胞形态不变 很低，细胞形态不变 很低，细胞形态不变 试剂稳定性 一般 较差 一般 很好 大批量样品检测 可以 非常适合 非常适合 非常适合 便捷程度 一般 便捷 便捷 非常便捷 CCK用途：药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验 操作说明： 一、制作标准曲线（测定细胞具体数量时） 1、先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞。 2、按比例（例如：1/2比例）依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做3-5个细胞浓度梯度，每组3-6个复孔。 3、接种后培养2-4小时使细胞贴壁，然后加CCK试剂培养一定时间后测定OD值，制作出一条以细胞数量为横坐标（X轴），OD值为纵坐标（Y轴）的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量（试用此标准曲线的前提是实验的条件要一致，便于确定细胞的接种数量以及加入CCK后的培养时间。） 二、细胞活性检测 1、在96孔板中接种细胞悬液（100μL/孔）。将培养板放在培养箱中预培养（在37℃,5% CO2的条件下）。 2、向每孔加入10 μL的CCK溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。 3、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。 4、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。 5、如果暂时不测定OD值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化。 三、细胞增值-毒性检测 1、在96孔板中配置100μL的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养24小时（在37℃5% CO2的条件下）。 2、向培养板加入10μL不同浓度的待测物质。 3、将培养板在培养箱孵育一段适当的时间（例如：6、12、24或48小时）。4、想每孔加入10μL CCK溶液（注意不要再孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。 5、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。6、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。 7、如果暂时不测定OD值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化。 注意：如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加CCK之前更换新鲜培养基（除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基），去掉药物影响。当然药物影响比较小的情况下，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。?备注：①建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK试剂后的培养时间。②有条件的情况下建议采用多通道移液器，可以减少平行孔减的差异。加入CCK试剂时，建议斜贴着培养板壁加，不要插到培养基页面下加，容易产生气泡，会干扰OD值读数。③白细胞可能需要培养较长时间。④当使用标准96孔板时，贴壁细胞的最小接种量至少为1,000 个/孔 (100 μL 培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低，因此推荐接种量不低于2,500 个/孔 (100 μL 培养基)。如果要使用24孔板或6孔板实验，请先计算每孔相应的接种量，并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK溶液。⑤如果没有450nm的滤光片，可以使用吸光度在430-490 nm之间的滤光片，但是450nm滤光片的检测灵敏度最高。 ⑥培养基中酚红的吸光度可以在计算时，通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不会对检测造成影响。活力计算： 细胞活力