肝脏靶向性纳米输送系统对肝切除后肝再生的效应.doc

肝脏靶向性纳米输送系统对肝切除后肝再生的效应 项目及经费概算 一立项的背景和意义[1,2]，还有一部分患者因担心术后肝功能衰竭而放弃手术，因此如何提高肝切除后余肝再生能力是肝外科重要的现实问题。肝脏血流丰富，以往促进肝再生的药物因不易在肝脏停留，导致作用浓度不足而缺乏有效性。血管内皮生长因子（VEGF）是肝再生的重要调控因子，已证实其是促进肝再生的强有力的效应因子，我们在两项国家自然科学基金的资助下，对大鼠肝切除后VEGF及受体释放的规律进行了研究，发现了其释放曲线与肝切除后再生的关系。结合这些结果，我们与材料学研究人员合作，改进同轴电纺工艺，通过主动设计新型可控释放生长因子的纳米材料，制备载有VEGF的PEG/PCL中空纳米纤维膜，控释VEGF浓度和释放时限，利用大鼠肝切除后的肝再生动物模型，通过肝切除切面、门静脉注射、胆管灌注不同形式，控释VEGF，使肝窦内皮细胞增殖高峰提前，以开发促进肝再生的肝脏靶向性的纳米控释系统。 研究结果具有以下意义：（1）有助于在分子、细胞、器官水平进一步阐明肝再生时VEGF同受体结合的时限、空间特点，对解释外源性VEGF促进肝再生这一现象的分子机制阐明有重要科学意义；（2）开发不同作用途径的载生长因子的肝脏靶向性纳米材料，为进一步干预肝再生提供更有效的治疗选择，为将来向临床实践转化提供应用研究数据。 （二国内外研究现状和发展趋势:肝实质细胞及非实质细胞。前者主要是指已分化成熟的肝细胞（Hepatocytes,HC）,Kupffer 细胞,窦状内皮细胞（sinusoidal endothelial cell，SEC(stellate cells ) 。肝细胞是肝再生主要的效应细胞，而各种非实质细胞,如Kupffer细胞,肝窦内皮细胞及星状细胞在肝再生进程中也扮演着重要的角色。从时间上讲，在肝部分切除模型中(Partial Hepatectomy,PH)首先是肝细胞再生,形成由10～14个肝细胞组成的无血管肝细胞岛,术后4d 可以观察到肝星型细胞侵入肝细胞岛,随后可以观察到有孔内皮细胞入侵,通过这种方式重建肝血窦，实现肝再生[3]。用增殖细胞核抗原（Proliferating Cell Nuclear Antigen，PCNA）标记指数测定大鼠70％肝切除再生模型，发现肝细胞增殖高峰出现在术后24h,而肝窦内皮细胞PCNA标记指数显示仅有肝细胞标记指数的15％，高峰出现在切除后72小时[4]。因此，肝细胞的增殖是肝切除后肝再生的主要事件，但肝窦内皮细胞的增殖是肝再生完成的必要前提。肝细胞增殖先于肝窦内皮细胞增殖，而肝窦内皮细胞的增殖又可促进肝细胞DNA复制，诱导肝再生[5]。（下图为肝再生过程中各种细胞增殖与时间的关系） （Hepatocytes－肝细胞；Billary ductular cells－胆管细胞；Kupffer and Ito cells－枯否氏和星型细胞，Sinuscidal endothelial cells－窦状内皮细胞[6]） 调控肝窦内皮细胞增殖的因素包括非特异性生长因子及特异性生长因子,非特异性因子包括TGF-α和TGF-β、TNF-α、HGF 及IL-8等[7]。现有研究已证实VEGF是肝窦血管内皮细胞强有力的、特异性的生长因子[8,9]。人类VEGF 基因定位于6 号染色体短臂1 区2带( 6p12) , 由7 个内含子和8 个外显子组成。VEGF 是一种对热、酸稳定具有肝素结合活性的糖蛋白,蛋白质结构具有高度的保守性,由二个糖蛋白单链通过二硫键形成二聚体。根据其mRNA 剪接方式不同形成5 种异构体即:VEGF121、VEGF145、VEGF165、VEGF189和VEGF206。VEGF 共有4 个受体,即fms样酪氨酸激酶受体-1 (fms-like tyrosine kinase 1 ,Flt-1，VEGFR1) 、含激酶插入受体(kinase domain insert containing receptor ,flk1/KDR，VEGFR2)、Flt3/Flk2（VEGFR3）和Flt-4（VEGFR4）。四种受体都是跨膜酪氨酸激酶受体,都有7 个免疫球蛋白样的细胞外区域、跨细胞膜区域以及一个含有酪氨酸激酶的细胞内区域[10]。 以往在肝切除后的肝再生的研究中，认为肝切除后肝细胞释放VEGF，VEGF的受体R1、R2分布于窦状内皮细胞，VEGF同VEGFR－1结合，释放IL－6、HGF、CTGF、HB－EGF，并不促进内皮细胞增殖，VEGF同VEGFR－2结合，执行促进内皮细胞增殖、移动、生存的功能，两条途径共同促进肝细胞增殖，VEGF通过旁分泌机制起作用。 实验证实，单独添加VEGF165、HGF、PDGF、IGFVEGF165是唯一可以促进内皮细