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人宫颈癌组织中survivin表达与临床分析 　　【摘要】 目的：检测人宫颈正常组织、宫颈上皮内瘤变（Cervical intraepithelial neoplasia，CIN）以及宫颈癌组织中survivin蛋白的表达定位，研究该因子与宫颈癌发生发展的关系和临床应用价值。方法：收集2年间某医院97例患者的石蜡组织标本，其中正常宫颈组织20例、CIN25例、宫颈癌52例。采用免疫组化方法检测组织切片中的survivin蛋白，研究该因子在组织中的蛋白表达定位。结果：在宫颈组织中，survivin蛋白在胞核以及胞浆内均可见阳性染色，主要定位于细胞核。正常组survivin阳性率为5.0%，CIN组阳性率为56.0%，宫颈癌组阳性率为82.7%。survivin在宫颈癌组织中的高表达，与宫颈癌的临床分期、病理分化以及淋巴结转移均呈正相关。结论：survivin与宫颈癌的发生发展密切相关，可能成为对人宫颈癌的预防、诊治，以及判断预后有价值的临床肿瘤相关指标。 　　【关键词】 宫颈癌； Survivin； 表达 　　妇科最常见的恶性肿瘤是宫颈癌，发患者群逐渐年轻化，发病率也呈升高趋势。宫颈良性病变经过逐步发展，过渡到上皮内瘤变（Cervical intraepithelial neoplasia， CIN），再从宫颈原位癌进展到浸润癌。宫颈癌的早期诊断、发生发展及预后相关因素是目前妇科肿瘤的研究热点。survivin作为一种重要的细胞周期依赖性凋亡抑制因子，在人类的多种肿瘤显示了广泛表达，survivin的研究在肿瘤的诊断和治疗上具有潜在的价值。目前，survivin与国人宫颈癌的基础与临床研究尚不多见。本研究区分正常宫颈、宫颈上皮内瘤变和宫颈癌3个组，通过免疫组化法检测survivin在人宫颈组织中的表达定位，分析survivin与宫颈癌的发病、临床分期、组织分型、淋巴结转移等因素，研究survivin与宫颈癌的发生发展、诊断治疗、以及预后的关系，评估survivin在宫颈癌的临床应用价值。 　　1 资料与方法 　　1.1 一般资料 病例资料来源于山东省淄博市中心医院，统计区间为2008年1月-2009年12月共2年时间。共收集2年间的患者石蜡组织标本97例，其中经病理确诊的CIN患者25例、宫颈癌患者52例，对照组为20例正常宫颈组织。患者年龄34～71岁，平均47岁。术前，患者均未接受化疗、放疗以及内分泌等治疗。按国际妇产科联???（international federation of gynecology and obstetrics，FIGO）的临床分期标准，宫颈癌患者Ia期7例，Ib期18例，Ⅱa期13例，Ⅱb期10例，III期4例。手术38例，临床分期为Ia期～Ⅱa期；Ⅱb期以上14例，行放化疗或综合治疗。其中，鳞状细胞癌37例，腺癌11例，腺鳞癌4例。癌组织分化情况：高分化11例，中分化21例，低分化20例。手术治疗的38例，有淋巴结转移者9例，无转移者29例。 　　1.2 主要试剂及仪器 主要试剂：兔抗人survivin单克隆抗体，北京中杉金桥生物技术有限公司；通用SP试剂盒购自北京中山公司；DaKoDAB显色试剂盒，北京中杉金桥生物技术有限公司。主要仪器设备有Motic Med 6.0数码医学图像分析系统、XLCU- PHY-Ⅲ病理组织漂烘仪、DaKo免疫组织化学染色机、Leica RM2235型石蜡切片机、日本奥林巴斯BX51型光学显微镜等。 　　1.3 实验方法 将石蜡包埋宫颈组织标本制作4 μm厚的病理切片，采用S-P法进行免疫组化染色，按照试剂盒说明书进行组织染色，常规设阴性对照。主要实验步骤如下：石蜡切片脱蜡至水，将脱完蜡的切片装载放入修复仪中，修复18 min，缓冲液冲洗5 min，在切片滴3%的H2O2溶液，室温孵育10 min，以阻断内源性过氧化物酶的活性；磷酸盐缓冲液（phosphate buffered saline，PBS）冲洗3次，每次3 min；滴加一抗，兔抗人survivin单克隆抗体，稀释度1：100，存于湿盒中，4 ℃冰箱过夜；次日清晨取出湿盒，恢复至室温，PBS冲洗3次，每次5 min；滴加二抗，湿盒37 ℃孵育40 min，PBS冲洗3次，每次5 min；DAB显色3～6 min，放自来水中终止显色，水洗；苏木素轻度复染5～10 min，水洗；梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。 　　1.4 评判标准 参考尹如铁等[1]的标准判断survivin在宫颈组织的免疫组织化学表达分布，阳性染色位于胞浆或胞核，出现棕黄色染色颗粒者为阳性细胞，染色强度分级如下：无染色计0分；轻度染色为淡黄色，计1分；黄色为中度染色，计2分；棕黄色为重度染色，计3分，根据阳性细胞占全