食品检验工高级操作技能试卷及答案.docVIP

1.食物中核黄素的测定方法 任何一种方法均可。 1主题内容与适用范围 本标准规定了用微生物法和荧光法测定食物中核黄素含量。 本标准适用于各类食物中核黄素的测定。 第一微生物法 2原理 某一种微生物的生长(繁殖)必需某些维生素。例如干酪乳酸杆菌(Lactobacillus casei，简称L.C.)的生长需要核黄素，培养基中若缺乏这种维生素该细菌便不能生长。在一定条件下，该细菌生长情况，以及它的代谢物乳酸的浓度与培养基中该维生素含量成正比，因此可以用酸度及混浊度的测定法来测定样品中核黄素的含量。 3试剂 本实验用水均需蒸馏水。试剂纯度均为分析纯。 3.1冰乙酸。 3.2甲苯。 3.3无水乙酸钠。 3.4乙酸铅。 3.5氢氧化铵。 3.6干酪乳酸杆菌(Lactobacillus casei ATCC 7469)。 3.7盐酸：0.1mol/L。 3.8氢氧化钠：1mol/L和0.1mol/L。 3.90.9%氯化钠溶液(生理盐水)：使用前应进行灭菌处理。 3.10核黄素标准储备液(25μg/mL)：将标准品核黄素粉状结晶置于真空干燥器或盛有硫酸的干燥器中。经过24h后，准确称取50mg，置于2L容量瓶中，加入2.4mL冰乙酸和1.5L水。将容量瓶置于温水中摇动，待其溶解，冷至室温，稀释至2L，移至棕色瓶内，加少许甲苯盖于溶液表面，于冰箱中保存。 3.11核黄素标准中间液(10μg/mL)：准确吸取20mL核黄素标准储备液，加水稀释至50mL。 3.12核黄素标准使用液(0.1μg/mL)：准确吸取1.0mL中间液于100mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。每次分析要配制新标准使用液。 3.13碱处理蛋白陈：分别称取40g蛋白陈和20g氢氧化钠于250mL水中。混合后，放于37±0.5℃恒温箱内，24～48h后取出，用冰乙酸调节pH至6.8，加14g无水乙酸钠(或23.2g含有3分子结晶水的乙酸钠)，稀释至800mL，加少许甲苯盖于溶液表面，于冰箱中保存。 3.140.1%胱氨酸溶液：称取1gL－胱氨酸于小烧杯中。加20mL水，缓慢加入约5～10mL盐酸，直至其完全溶解，加水稀释至1L，加少许甲苯盖于溶液表面。 3.15酵母补充液：称取100g酵母提取物干粉于500mL水中，称取150g乙酸铅于500mL水中，将两溶液混合，以氢氧化铵调节pH至酚酞呈红色(取少许溶液检验)。离心或用布氏漏斗过滤，滤液用冰乙酸调节pH至6.5。通入硫化氢直至不生沉淀，过滤，通空气于滤液中，以排除多余的硫化氢。加少许甲苯盖于溶液表面，于冰箱中保存。 3.16甲盐溶液：称取25g磷酸氢二钾和25g磷酸二氢钾，加水溶解，并稀释至500mL。加入少许甲苯以保存之。 3.17乙盐溶液：称取10g硫酸镁(MgSO4·7H2O)，0.5g硫酸亚铁(FeSO4·7H2O)和0.5g硫酸锰(MnSO4·4H2O)，加水溶解，并稀释至500mL，加少许甲苯以保存之。 3.18基本培养储备液：将下列试剂混合于500mL烧杯中，加水至450mL，用1mol/L氢氧化钠溶液调节pH至6.8，用水稀释至500mL。 碱处理蛋白陈100mL 0.1%腕氨酸溶液100mL 酵母补充液20mL 甲盐溶液10mL 乙盐溶液10mL 无水葡萄糖10g 3.19琼脂培养基：将下列试剂混合于250mL三角瓶中，加水至100mL，于水浴上煮至琼脂完全溶化，用1mol/L盐酸趁热调节pH至6.8。尽快倒入试管中，每管3～5mL，塞上棉塞，于高压锅内在6.9×104Pa(10lb/in2)压力下灭菌15min，取出后直立试管，冷至室温，于冰箱中保存。 无水葡萄糖1g 乙酸钠(NaAc·3H2O)1.7g 蛋白陈 0.8g 酵母提取物干粉 0.2g 甲盐溶液0.2mL 乙盐溶液0.2mL 琼脂1.2g 3.200.04%溴甲酚绿指示剂：称取0.1g溴甲酚绿于小研钵中，加1.4mL 0.1mol/L氢氧化钠溶液研磨，加少许水，继续研磨，直至完全溶解。用水稀释至250mL。 3.210.04%溴麝香草酚蓝指示剂：称取0.1g溴麝香草酚蓝于小研钵中，加1.6mL 0.1mol/L氢氧化钠溶液研磨。加少许水，继续研磨，直至完全溶解，用水稀释至250mL。 4仪器与设备 4.1实验室常用设备。 4.2电热恒温培养箱。 4.3离心沉淀机。 4.4液体快速混合器。 4.5高压消毒锅。 5菌种的制备与保存 5.1储备菌种的制备：以L.C.纯菌种接入2个或多个琼脂培养基管中。在37±0.5℃恒温培养箱中保温16～24h。贮干冰箱内，至多不超过2周，最好每周移种一次。保存数周以上的储备菌种，不能立即用于制备接种液，一定要在使用前每天移种一次，连续2～3d方可使用，否则生长不好。 5.2种子培养液的制备：取5mL核黄素