实验二 血液实验Blood Experiment.pptxVIP

实验二 血液学实验 浙江大学动物生理实验室 目的 掌握实验用兔颈动脉采血的方法 了解红细胞比容及其测定方法 血液凝固的基本过程及影响血凝的一些因素 原理 将抗凝血放在特制有刻度的玻璃管(温氏分血管)中，经过离心沉淀，使血细胞与血浆分离。红细胞下沉，彼此压紧而又不改变每个血细胞的正常形态。根据玻璃管刻度的读数，可以计算出红细胞在全血中所占的容积百分比——即红细胞比容。 图 温氏分血管 血液凝固可分为三个主要步骤: 第Ⅰ阶段是凝血因子FX激活成FXa并形成凝血酶原复合物（凝血酶原激活物） 第Ⅱ阶段是凝血酶原（Prothrombin，FⅡ）激活成为凝血酶（thrombin，FⅡa） 第Ⅲ阶段是纤维蛋白原（FI）转变成纤维蛋白（filbrin，FIa） 在这三个主要步骤中都需要Ca离子的参与 材料及设备 大兔一只，兔手术保定台， 烧杯（500ml，50ml），常用手术器械（手术刀、毛剪、手术剪、止血钳），线 动脉套管，动脉夹 温氏分血管，长颈滴管，5毫升试管，离心机，天平，5ml 注射器 试管，试管架，吸管 2％戊巴比妥钠，3.8％柠檬酸钠，肝素，1％氯化钙，5％草酸钾，液体石蜡，带有开叉橡皮管的玻棒等。 方法及步骤 手术操作 2％戊巴比妥钠按1ml/kg的剂量从耳缘静脉注入实验用兔 麻醉后仰卧固定于手术台上（同时准备实验用试管等） 剪去颈部术野的被毛，切开皮肤，找出两侧颈动脉 将颈动脉剥离2厘米左右，然后在颈动脉下面穿两条线。将一侧颈动脉在远心端用线结扎，再于近心端用动脉夹夹住。结扎处与动脉夹之间最好不少于1.5厘米 用眼科剪刀在这段动脉上靠近结扎处1／4的地方，斜向近心方向剪一小口，将动脉套管插入，用线扎好，以免滑脱，待用（需采集血样时打开动脉夹即可） 图 兔颈局部解剖图 1喉及气管 2颈总动脉 3迷走神经 4交感神经 5减压神经 6节状神经 7颈前神经节 8喉区神经9主动脉弓 10迷走心神经 比容的测定： （1）用配有长注射针的注射器吸取含肝素的抗凝血，然后将注射针插入温氏分血管的底部，缓缓地将滴管内的血液注入分血管内(不得有气泡)，使血液正确地装到刻度10处。 （2）离心：将温氏分血管放入离心机中，以每分钟3000转的速度离心30分钟。取出分血管，观察红细胞所占的容积并记录其数值(不包括白细胞和血小板沉积所形成的灰白色薄层)。然后再以3000转速度离心5分钟，如红细胞的容积与上次记录相同，表明红细胞已被压紧，读数即为红细胞的比容(如读数为4. 0，即表示100毫升血液中，红细胞容积占40毫升)。 影响血凝的因素 影响血凝的物理因素 a 取试管3支，一支管内加少量棉花，一支管内壁涂少许液体石蜡，一支不作任何处理，为对照。 b 将以上三支试管分别加入新鲜血液2毫升，每30秒轻轻地倾斜试管一次，分别记录三支试管的凝血时间。 温度对血凝的影响 取试管两支，分别加入新鲜血液2毫升。一管置于常温或37℃水浴中，一管放在低温或冰箱内，记录两支试管的凝血时间。 钙离子对血凝的影响 1．取试管3支，一支放入3.8％柠檬酸钠3滴，一支加入5％草酸钾3滴，一支不作任何处理，为对照(与1共用)。然后，再向各管分别加入1毫升新鲜血液，混合后观察并记录血凝情况。 2．将加入柠檬酸钠管和草酸钾管分别再加1％CaCl2 1—2滴后，观察并记录血凝情况。 肝素的作用 取一支试管放肝素8单位，再加入新鲜血液1毫升，摇匀后，观察其结果。 取新鲜血液50毫升，放入烧杯中用带有开叉橡皮管的玻棒搅动，以除去其中的纤维蛋白；将除去纤维蛋白的血液静置之，观察其能否凝固。 结果 将上述实验步骤的结果填入下表。 序号    项目 处理 结果 备注 1 比容 3000rpm,30min, 3000rpm,5min, 2 物理因素对血凝影响 棉花 2ml血液 液体石蜡 对照 与“3”共用 3 钙离子对血凝的影响 3.8%柠檬酸钠 1％CaCl2 1ml 血液 5％草酸钾 4 温度对血凝的影响 37℃ 2ml血液 4℃ 5 肝素的作用 肝素8单位 1ml 血液 与“1”共用 6 纤维蛋白 开叉橡皮管的玻棒搅动 分析讨论 蟾蜍实验（一） 1、学习破坏两栖类脑脊髓的方法和神经肌肉标本、神经标本制备的方法。 2、测定蟾蜍坐骨神经的绝对不应期和相对不应期，并了解其测定原理。 3、观察蛙类坐骨神经干的单相、双相动作电位基本波形，并了解其产生原理。 4、测定蛙类坐骨神经兴奋的传导速度并了解其原理。