生化试验课件实验六：胰岛素和肾上素对家兔血糖浓度的影响.pptVIP

实验六 胰岛素和肾上腺素对家兔血糖浓度的影响 刘向华 南京医科大学 生化与分子生物学系 Nanjing medical university Department of biochemistry and molecular biology 目的与要求： 通过对实验家兔在激素注射前、后血糖含量的测定， 了解激素对血糖浓度的影响。 血糖的来源和去路 血 糖 食物中糖 消化吸收 肝糖原 分 解 非糖物质 糖异生 CO2、H2O、能量 氧化分解供能 合 成 肝糖原、肌糖原 合 成 脂肪、氨基酸等非糖物质 3.89 ～ 6.11 mmol/L 来 源 去 路 实验原理： 人与动物体内的血糖浓度受各种激素的调节而维持恒定， 影响血糖浓度的激素分为两类： 降低血糖的激素：胰岛素 升高血糖的激素：肾上腺素、胰高血糖素、 糖皮质激素和生长激素 实验原理P 80 ： 颜色的深浅与葡萄糖含量成正比，用比色法测定待测血样光密度值（Optical density， OD值），与经同样处理标准葡萄糖溶液比较(标准管法)，即可求得血中葡萄糖的含量. 酸性 加热 - 3H2O 羟甲基糠醛 邻甲苯胺 醛亚胺（蓝色） 血样中的葡萄糖 实验步骤： 家兔2只，禁食16h，称其体重并记录。 心脏内取血2-3ml，抗凝，标明胰-1，肾-1。 皮下注射胰岛素和肾上腺素，记录时间，胰1h，肾30min。 心脏内取血2-3ml ，抗凝，标明胰-2，肾-2。 胰-1，胰-2，肾-1 ，肾-2，移入离心管， 2000 r/min离心15 min，取上层血浆作血糖测定用。 邻甲苯胺法测定血糖浓度 （参考Page 80 实验24 邻甲苯胺法测定血糖） 实验步骤： 标准管 测定管 空白管 邻甲苯胺试剂 6.0ml 6.0ml 6.0ml - 0.1ml - 血浆 - 0.5ml - 葡萄糖标准液 （0.2mg/ml） 1.0ml 0.9ml 0.5ml 蒸馏水 邻甲苯胺法测定血糖浓度（4只大试管） 混匀各管，沸水浴中加热15min后取出，用流水冷却。 波长620nm，以空白管调吸光度零点，读取各管的吸光度。 试剂（ ml ） 胰-1、2，肾-1、2 血糖（mg/100ml）= × 100 0.1 m测定管中葡萄糖含量 m标准管中葡萄糖含量 = V标准管×C标准管 ( 0.5 ml × 0.2 mg / ml ) 实验结果及讨论： A测定管 A标准管 ×m标准管中葡萄糖含量 = m测定管中葡萄糖含量 注意事项： 1 注射针管5ml，9号针头 2 心脏内取血、皮下注射 3 离心机，微量移液器，分光光度计 4 沸水浴时注意安全。 5 生理盐水润洗针管、针头、三角烧杯 血糖升高 1、糖尿病 2、内分泌疾病：甲亢、肾上腺皮质功能亢进、嗜铬细胞瘤、 胰高血糖素瘤 3、妊娠高血糖 4、胰腺疾病：坏死性胰腺炎、胰腺手术、原发胰腺癌 5、应激性高血糖 血糖降低 1、胰岛β细胞瘤或增生 2、内分泌疾病：垂体前叶功能减退症、肾上腺皮质功能减低 3、肝源性低血糖，各种肝病致肝功能衰竭 血糖测定的临床意义 快速血糖测定仪 * 测试时间: 5~15秒 * 测试范围: 1.1~33.3 mmol/L * 试纸条自动吸血（1~10μl）* 自动显示血量是否合适* 试纸条芯块自动识别试纸编码* 温度范围: 10~35℃