鹿仙草活性成分提取纯化与抗氧化护肝活性研究.docVIP

鹿仙草活性成分提取纯化及抗氧化护肝活性研究 筒鞘蛇菰（Balanophora involucrata Hook.f.）为蛇菰科蛇菰属植物，别名鹿仙草[1]，蛇菰为寄生性草本植物，一年或多年生，无叶绿素和气孔，叶退化呈鳞片状或不存在，无正常根，靠根茎上的吸盘寄生于寄主植物的根上，根茎粗，通常分枝，表面常有瘤或星芒状皮孔，顶端具开裂的裂鞘。其全草入药, 寄主分布于海拔500-2600m的多种林木, 植株大多在中秋前后露出地面, 生长季节性强, 生长期短, 故资源稀少。资源分布：分布于福建、湖北、广东、广西、四川、云南等地,用氯仿-甲醇系统梯度洗脱得到反式咖啡酸、反式香豆酸、氢醌。王彦改[9]用95%乙醇回流提取得粗液，然后用乙酸乙酯进行萃取，用Sephadex LH-20(甲醇-水)、硅胶制备薄层(甲苯-甲酸乙酯-甲酸)和Toyopearl HW-40C (乙醇-水) 进行反复色谱分离,得到8种纯度较高的化合物。 蛇菰中含有三萜类、苯丙素类、甾醇类、鞣质类、黄酮类及其苷类等多种化学成分，其中三萜类、苯丙素类及黄酮类均具有抗氧化活性[10]。 多酚类成分是蛇菰属植物中所含的一大类成分，是止血、抗炎、抗氧化以及抗肿瘤的主要有效成分。黄酮类多含有多羟基，是抗氧化、抗病毒以及抗肿瘤的主要有效成分。蛇菰属植物作为药用具有许多活性，除用于治疗肺热咳嗽、吐血、肠风下血、腰痛、痔疮外，还有一部分品种用于治疗肝炎、肿瘤，效果良好。 在护肝方面，C.NLin等[11]对包括蛇菰素A和B在内的抗肝损伤药物进行的研究中已经证明了蛇菰素具有较强的保肝活性。戎聚全等[12]采用毒理和生化方法检测蛇菰的安全性及其解酒毒后小白鼠的死亡率和血中乙醇浓度的变化,观察蛇菰对修复酒精性肝损害的病理变化。研究发现蛇菰具有解酒毒作用。汤子春[13]进一步研究了鹿仙草护肝的作用机理，酒精在人体内经ADH和ALDH两种酶的作用，转化为CO2和水，鹿仙草的提取物可以提高ADH 和ALDH 的活性, 可以加快乙醇在体内的代谢速度; 还可以增强SOD和GSH-Px的活性, 以清除酒精在人体内产生的自由基, 保护细胞膜的结构和功能, 减轻肝组织的损伤。以鹿仙草的乙酸乙酯提取物为原料制成一种醒酒剂[14]具有良好的解除急性酒精中毒及降低血液中的乙醇含量。 在抗肿瘤方面，白树勋[15]等人对疏花蛇菰B.氯仿提取物的抗小鼠实体型肝肿瘤H22活性的研究表明，其具有良好的抗肿瘤活性。戴忠[7]也证明了蛇菰的乙酸乙酯提取物对小鼠实体型肝肿瘤H22有较强的抑制作用。经化学分离结果可知，乙酸乙酯的提取物中含有大量的酚酸类，尤其以没食子酸占主要量。文献研究表明[16]：没食子酸具有明显的抗肿瘤活性。作用机理主要有两种，一是没食子酸可引起肿瘤细胞染色体DNA在核小体间断裂，从而诱导肿瘤细胞调亡，其活性基团主要是三个邻羟基。二是没食子酸具有较强的抗氧化、抗自由基活性。氧化和自由基损伤被公认是引起细胞DNA损伤进而导致细胞恶变的重要机制之一。张金彦[17]利用拉曼光谱研究了鹿仙草对SMMC-7721肝癌细胞的作用，结果发现，鹿仙草可以与肝癌细胞内的DNA、蛋白质相作用，从而诱导肝癌细胞凋亡。药物可以使得DNA链发生断裂，DNA含量下降，但DNA构象并未发生反应，药物可能插入到碱基对之间，使DNA复制受到抑制，从而可能诱导细胞的凋亡，药物作用效果随药物浓度的增大而增加。国药准字18]对对肝癌细胞的生长有显著的抑制作用、对人体毒副作用低，可广泛用于对肝癌的治疗。 抗氧化作用：自由基是在机体氧化反应中自然产生的强氧化性化合物，可损害机体的组织和细胞，引起慢性疾病及衰老效应，而抗氧化剂是一类能够阻断自由基产生和清除自由基的物质。适量补充外源性抗氧化剂来提高机体对自由基的清除能力，使机体内自由基产生与清除保持平衡，对于延缓人体衰老和预防各种老年性疾病具有重要意义。DPPH·是一种稳定的自由基，在有机溶剂中呈紫色，在517nm 波长有较大吸收，当加入抗氧化剂后一部分自由基被清除，使在该波长下吸收减弱，可借此来评价某物质的抗氧化活性。邓靖[10]采用DPPH·法证明了蛇菰中含有抗氧化活性较好的物质，尤其是乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物、乙醇提取物及水提粗多糖等极性较强的物质。由此推断出蛇菰中抗氧化物质应该主要是一些大极性物质，这些物质容易被乙酸乙酯、正丁醇、水等极性溶剂提取获得，而氯仿、石油醚等溶剂提取所得的弱极性物质活性很低或者不具活性。蛇菰各提取物对DPPH·的清除作用呈随浓度增大而增加趋势，但当达到一定浓度后样品对DPPH·的清除率随浓度增大，变化趋于平缓。王慧[19]等采用DPPH·法对筒鞘蛇菰提取物抗氧化作用研究中发现其对DPPH·有一定的清除率，且清除率随浓度的增大而升高，当其浓度达到