实用酶化学基础(酶工程)复习资料.docVIP

1．固定化定义：是通过物理的或化学的手段，将酶束缚于水不溶的载体上，或将酶束缚在一定的空间内，限制酶分子的自由流动，但能使酶充分发挥催化作用。优点：易于与产物分离；可反复使用；可连续化生产；稳定性好。 2．酶的固定化方法：吸附法、共价偶联法、交联法、包埋法（网格型，微囊型） 3．固定化酶的性质：①活性：酶活性↓，反应速度↓。通常＜天然酶。②稳定性：固定化酶的稳定性一般比游离酶的稳定性好。③最适温度：多数酶固定化后热稳定性↑，最适温度↑④最适pH ：带负电荷载体 ：最适pH 向碱性偏移。反之。⑤动力学特征：固定化载体与底物电荷相反,固定化酶的表观Km值降低。反之⑥作用专一性：大分子底物难于接近酶分子，导致酶的专一性发生改变。 4．盐析法：利用不同蛋白质在不同的盐浓度下溶解度不同的特性，在酶液中添加一定浓度的中性盐，使酶或杂质从溶液中析出沉淀，使酶与杂质分离。 有机溶剂沉淀法：利用酶与其它杂质在有机溶剂中的溶解度不同，通过添加一定量的某种有机溶剂，使酶或杂质沉淀析出，从而使酶与杂质分离。 膜分离技术：借助于一定孔径的高分子薄膜，将不同大小、不同形状和不同特性的物质颗粒或分子进行分离的技术称为。 5. 凝胶层析：以各种多孔凝胶为固定相，利用流动相中所含各种组分的相对分子质量不同而达到物质分离 亲和层析：利用生物分子与配基之间所具有的专一而又可逆的亲和力，使生物分子分离纯化 电泳技术：是根据各种带电粒子在电场中迁移速度的不同而对物质进行分离的实验技术。 6．酶的总活力为样品的全部酶活力。总活力 = 酶活力 × 总体积 (mL)或总质量g。 比活力 ：单位蛋白质 (毫克蛋白质或毫克蛋白氮) 所含有的酶活力 (单位/毫克蛋白) 。 回收率：指每一步所得的总活力与第一步总活力之比。回收率＝每次总活力/第一次总活力 7．酶的制剂形式：固体：干燥（冰冻升华，喷雾干燥，真空干燥）；液体 酶的保存方法(1) 温度。(2) pH与缓冲液。(3) 酶蛋白浓度。(4) 氧。 低温下短期保存。 （5）为提高酶稳定性，常加入下列稳定剂：底物、抑制剂和辅酶， 8.同工酶(isoenzyme)是指催化相同的化学反应，而酶蛋白的分子结构（不同的氨基酸序列、空间结构等）、理化性质乃至免疫学性质不同的一组酶。 9.简单酶:仅由氨基酸残基构成 结合酶:蛋白质＋非蛋白质 10.酶蛋白：决定反应的特异性；辅助因子：决定反应的种类与性质；辅因子：酶蛋白中非蛋白质部分，它可以是无机离子也可以是有机化合物。 辅酶：与酶蛋白结合较松的小分子有机物；辅基 以共价键和酶牢固地结合的小分子有机物；金属激活剂：金属离子作为辅助因子 11.酶的活性中心：指必需基团在空间结构上彼此靠近，组成具有特定空间结构的区域，能与底物特异结合并将底物转化为产物。酶活性中心的特点：① 活性中心在酶分子总体积中只占相当小的部分（约1%(2%），相当于2(3个氨基酸残基。② 都是酶分子表面的一个凹穴，有一定的大小和形状，但不是刚性的，而具有一定的柔性。③ 活性中心为非极性的微环境，有利于与底物结合。④底物与酶通过形成较弱键力的次级键相互作用并结合到酶的活性中心。 ⑤ 酶的活性部位并不是和底物的几何图形正好吻合，而是在酶与底物结合的过程中，底物分子或酶分子或它们两者的构象同时发生一定变化后才相互契合，这时催化基团的位置也正好处于所催化底物的敏感化学键部位 12.调节中心：可以与小分子的代谢物相结合，使酶分子的构象发生改变，从而影响酶的活性。这种作用叫变构效应(又叫别构效应) 14.酶活性调节：机理（酶活性部位形成或暴露的过程），意义（避免细胞产生的酶对细胞进行自身消化，使酶在特定的部位环境中作用）。共价修饰：在其他酶的催化下，酶蛋白肽链上的一些基团可与某种化学基团发生可逆的共价结合，从而改变酶的活性 15.①竞争性抑制Vmax不变，Km变大②非竞争性抑制 Vmax变小， Km值不变③ 反竞争性抑制Km及Vmax都变小。常见抑制剂：丝氨酸酶抑制剂，巯基酶抑制剂 16.酶非水相催化的类型：有机介质中的酶催化；气相介质中的酶催化。 有机介质中的酶催化：酶在含有一定量水的有机溶剂中进行的催化反应。 必需水：维持酶分子完整空间构象所必需的最低水量。 17.有机溶剂对酶催化反应的影响：1.有机溶剂直接与酶附近的必需水相互作用2.有机溶剂能通过直接与酶作用引起抑制或失活3.有机溶剂与扩散的底物或产物相互作用而影响酶活。 有机介质酶催化的优点：在有机介质中由于水分减少，相对来说酶分子的构象表现出比在水溶液中更具有“刚性”，因而使通过选择不同性质的溶剂来调控酶的某些特性成为可能。 18.酶的生产方法：提取分离法，发酵法，化学合成法。 19.优良产酶菌种应具备的条件：繁殖快，产酶量高，有利于缩短生产周期。易培养。产生的酶容易分离纯