2016新课标创新人教生物选修1 专题5 课题1 DNA的粗提取及鉴定.docVIP

一、基础知识提取DNA的方法和原理(1)提取生物大分子的思路：选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。(2)DNA粗提取方法：利用DNA与 RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异提取DNA去除其他成分。的性质(1)DNA的溶解性和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶不同利用这一特点选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解而使杂质沉淀或者相反以达到分离目的。不溶于酒精溶液但是细胞中的某些蛋白质溶于酒精。(2)DNA的耐受性蛋白酶能水解蛋白质但是对 DNA没有影响。大多数蛋白质不能忍受 60～80 ℃的高温而DNA在80 ℃以上才会变性。洗涤剂能够瓦解细胞膜但对DNA没(3)DNA的鉴定＋二苯胺蓝色。二、实验设计实验材料的选取：选用 DNA含量相对较高的生物组织。破碎细胞DNA的滤液(1)动物细胞的破碎(以鸡血为例)：在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水同时用玻璃棒搅拌过滤后收集滤液即可。(2)植物细胞的破碎(以洋葱为例)：先将洋葱切碎然后加入一定的洗涤剂和食盐进行充分地搅拌和研磨过滤后收集研磨液。去除滤液中的杂质 方案一 方案二 方案三 利用DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度的不同通过控制NaCl溶液的浓度去除杂质 直接在滤液中加入嫩肉粉反应～15 min嫩肉粉中的木瓜蛋白酶能够分解蛋白质 将滤液放在60～75_℃的恒温水浴箱中保温10～注意严格控制温度范围4.DNA的折出：利用DNA不溶于酒精溶液这一原理可从溶液中析出较纯净的DNA此时DNA的状态为白色丝状物。的鉴定：将白色丝状物溶解于5 mL物质的量浓度为 2 mol/L的NaCl溶液中再加入4 mL的二苯胺试剂沸水中加热5 min冷却后观察溶液的颜色同时设置不含DNA的NaCl溶液作为对照实验。三、操作提 1．以血液为实验材料时每100 mL血液中需要加入3 g柠檬酸钠防止血液凝固。加入洗涤剂后动作要轻缓、柔和否则容易产生大量的泡沫不利于后续步骤的操作。加入酒精和用玻璃棒搅拌时动作要轻缓以免加剧DNA分子的断裂导致DNA分子不能形成。鉴定DNA用的染色剂二苯胺试剂要现配现用否则会影响鉴定的效果。 [共研探究]DNA主要分布于细胞核中要将DNA分离出来DNA的性质将DNA与其他细胞成分分开。的溶解性(1)DNA在NaCl溶液中的溶解度如图所示当NaCl溶液浓度低于0.14 mol/L时的溶解度随NaCl溶液浓度的增加而逐渐降低；当NaCl溶液浓度等于时的溶解度最小；当NaCl溶液浓度继续增加时的溶解度又逐渐增大。 (2)在酒精中的溶解度：DNA不溶于酒精而细胞中的某些蛋白质溶于酒精利用这一原理可以将DNA与蛋白质进一步地分离。提取DNA的方法(1)利用溶解性提取DNA NaCl溶液 酒精(体积分数为95%的冷酒精) DNA 不溶 蛋白质 NaCl溶液物质的量浓度从2 mol/L逐渐稀释的过程中蛋白质溶解度逐渐增大 某些蛋白质可溶(2)利用耐受性提取DNA DNA 蛋白质 蛋白酶 没影响 水解 高温 80 ℃以上才会变性 60～80 ℃会变性 洗涤剂 没影响 瓦解细胞膜3.DNA的在沸水浴的条件下遇二苯胺呈现蓝色可用来鉴定DNA。 [总结升华]的相关性质 DNA 在不同浓度的溶液中的溶解性 溶解 析出 　 在酒精溶液中的溶解性 析出 对高温的耐受性 80 ℃以上才会变性 对蛋白酶的耐受性 无影响 鉴定方法 与二苯胺在沸水浴条件下反应呈蓝色【易错易混】　根据DNA的溶解性判断DNA的去向(1)DNA在2 mol/L的NaCl溶液中溶解过滤后要保留滤液。(2)DNA在0.14 mol/L的NaCl溶液中析出过滤后要保留黏稠物舍弃滤液。(3)DNA在酒精溶液中析出用玻璃棒卷起丝状物即可不用过滤。[对点演练] 1．在“DNA的粗提取与鉴定”实验中实验原理是DNA在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度不同据图分析下列叙述正确的是(　　) A．a点浓度最适合析出DNA点浓度最适合析出DNA点浓度最适合析出DNA点浓度最适合析出DNA解析：选B　从题图可以看出在浓度为0.14 mol/L的NaCl溶液中的溶解度最小因b点浓度最适合析出DNA。 [共研探究]我们可以利用DNA的理化特性从生物材料中提取DNA并进行鉴定。实验材料的选取及处理方法(1)一般选取鸡血来提取DNA鸡血中血细胞含量高含量丰富材料易得细胞易吸水涨破。(2)可以选用植物材料如洋葱等只是破碎细胞比较麻烦。先将洋葱切碎然后加入一定的洗涤剂和食盐进行充分搅拌和研磨过滤后收集研磨液。的粗提取与鉴定的实验过程 步骤 操作方法 原理 制备鸡血细胞液 取0.3 g/mL的柠檬酸钠溶液10 mL与100 mL新鲜的鸡血混匀然后静置一天或离心机离心约～3 mi