第三章 动物细胞培养产酶.pptVIP

细胞培养(cell culture)技术 即是选用各种细胞的最佳生存条件对活细胞进行培养和研究的技术，是广泛应用于生物技术研究领域的重要技术。 细胞系 培养物开始第一次传代培养后的细胞 有限细胞系（Finite Cell Line） 连续细胞系或无限细胞系（Infinite Cell Line） 肿瘤细胞系或株我国已建细胞系主要为这类细胞。 肿瘤细胞系多由癌瘤建成，多呈类上皮型细胞 。 具有不死性和异体接种致瘤性。 细胞株 用单细胞分离培养增殖形成的具特定生长特性的细胞群 再由原细胞株进一步分离培养出与原株性状不同的细胞群，亦可称之为亚株。 原代培养 直接从体内取出的细胞进行的第一次培养物。 优点： 组织细胞刚脱离机体，生物性状尚未发生较大变化，在一定程度上能够反映体内的状态。 大鼠肝细胞原代培养 1.细胞种类： 大鼠原代肝细胞；2.培养的天数： 刚分离，未经培养；3. 细胞状态与特征简述：刚分离时球形透亮，贴壁， 后呈不规则。 传代培养 将细胞从一个培养瓶转移到另一个培养瓶即称为传代培养 原代培养的细胞在生长、繁殖一定时间后，由于空间不足或细胞密度过大导致营养枯竭，会影响细胞的生长，因此需要进行扩大培养，即传代或称为传代培养。 HepG2细胞 细胞种类： 人肝肿瘤细胞； 培养的天数： 传代培养2天； 细胞状态与特征简述：呈多角型、不规则 贴壁生长，成团聚集。  细胞分离方法 离 心 机械或酶法 杂交瘤 愈伤组织 酶消化 原生质体 细胞培养方法 悬浮 固体 贴壁 液体浅层 微载体 液体悬浮 细胞培养目的 疫苗 色素 激素 药物 多肽药物 香精 抗体 酶 酶 皮肤等 第一节 动植物细胞中酶生物合成的调节 动植物细胞的基因表达和调节控制比微生物复杂得多。 1、细胞分化改变酶的生物合成 基因表达的时间性和空间性 2、基因扩增加速酶的生物合成 通过增加基因的数量来调节基因表达的一种方式。 3、增强子促进酶的生物合成 高效增强某些酶基因的表达，具有细胞或组织特异性。 4、抗原诱导抗体酶的生物合成 抗体酶 抗体酶 或催化抗体（Catalytic antibody)是一种新型人工酶制剂，是一种具有催化功能的抗体分子，在其可变区赋予了酶的属性。它是利用现代生物学与化学的理论与技术交叉研究的成果，是抗体的高度选择性和酶的高效催化能力巧妙结合的产物。 制备的方法主要有：修饰法和诱导法。 诱导法：半抗原诱导法和酶蛋白诱导法。 动物，植物和微生物细胞特性比较 第二节 植物细胞培养产酶 植物细胞培养和从完整的植物生产紫草宁的比较 植物细胞培养基的组成 （3）细胞悬浮培养 悬浮培养： 植物细胞的悬浮培养是一种使组织培养物分离成单细胞并不断扩增的方法。在进行细胞培养时，需要提供容易破裂的愈伤组织进行液体振荡培养，愈伤组织经过悬浮培养可以产生比较纯一的单细胞。用于悬浮培养的愈伤组织应该是易碎的，这样在液体培养条件下能获得分散的单细胞，而紧密不易碎的愈伤组织就不能达到上述目的。 4、植物细胞培养的条件控制 （1）温度的控制 一般在室温范围（25℃） （2）pH的控制 在微酸性范围 pH5.0-6.0 （3）溶解氧的控制 （4）光照的控制 （5）前体的添加 （6）刺激剂的添加 5.植物细胞培养产酶实例 以大蒜细胞培养生产超氧化物歧化酶（SOD）为例 (1)大蒜愈伤组织的诱导 选取结实、饱满、无病虫害的大蒜蒜瓣，去除外皮，先用70%乙醇消毒20s，再用0.1%升汞消毒10min，然后无菌水漂洗3次。 在无菌条件下，切成0.5cm3的小块，植入含有3mg/L 2,4-D和1.2mg/L 6-BA 的半固体MS培养基中，在25℃，600lux，12h/d光照条件下培养18d，诱导得到愈