实验1大肠杆菌的培养和分离2013-9-11emmappt课件.ppt

定义:结构简单、形体微小的单细胞、多细胞或没有细胞结构的低等生物，包括病毒、原核生物(细菌、放线菌、蓝细菌、支原体、衣原体)、原生生物(最简单的真核生物)和某些真菌（酵母菌、霉菌）。 微生物 显微镜 功能（1）放线菌和霉菌中提取抗生素 （2）酵母菌发酵酿酒 （3）乳酸菌发酵制作泡菜 （4）醋酸菌发酵制作醋 （5）红曲霉和毛霉发酵制作腐乳 （6）微生物用于治理环境 细菌：是单细胞的原核生物。 结构组成：细胞壁（肽聚糖）、细胞膜、细胞质，拟核 分裂方式：二分裂（产生子细胞） 菌落(子细胞群体) 单 菌落：由单个细菌（或其他微生物）在适宜固体培养基表面或内部生长繁殖到一定程度；形成肉眼可见有一定形态结构等特征的子细胞的群落。 不同微生物形成的菌落具有不同的特征（形态、突起、边缘），是鉴定菌种的重要依据。 酵母菌 放线菌 霉菌 大肠杆菌 大肠杆菌（E.coli） 分布：人和哺乳动物肠道，此外还广泛分布于水、 污水、土壤、谷类、乳制品等当中。 大肠杆菌在人体的_____中一般对人体无害，但任何 大肠杆菌如果进入__________都会对人体产生危害。 大肠杆菌是_______工程中被广泛采用的工具。 肠道 泌尿系统 基因 革兰氏______（填阴或阳）性菌 阴 代谢类型： 异养，兼性厌氧型 生长适宜温度： 质粒、 EcoRⅠ限制酶、 E.coli-DNA连接酶、 受体细胞 37℃左右 实验一 大肠杆菌的培养和分离 1.进行大肠杆菌的扩增，利用液体培养基进行细菌培养的操作 2.进行大肠杆菌的分离,用固体平板培养基进行细菌的划线培养 3.说明大肠杆菌培养的条件和操作要求的原理 实验目的 LB液体（固体）培养基 一、配制培养基 培养基：是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。 水、碳源、氮源、无机盐、生长因子 (生长因子即细菌生长必需，而自身不能合成的 化合物,如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶) 1、成分 区别于动物培养与植物培养：不加激素 固体培养基与液体培养基的区别：琼脂 成分 作用 主要来源 碳源 主要作能源物质 无机碳(CO2) 或有机碳(糖类) 氮源 合成含N类化合物 N2，NH3，铵，硝酸盐 尿素，牛肉膏，蛋白胨 无机盐 调节渗透压等 水 生长因子 调节促生长 维生素，AA，碱基等 如NaCl 一、配制培养基 不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方 实例： “细菌喜荤，霉菌喜素” 细菌培养基要用蛋白胨和酵母提取物来配制，还要加入一定的氯化钠，以维持一定的渗透压； 霉菌培养基一般用无机物配制或添加蔗糖的豆芽汁 调节pH 真菌：5～6 细菌：6.5 ～ 7.5 溶解 计算称量 调pH 分装 加塞，包扎 灭菌 2、过程 勿沾到瓶口或者壁上，易污染，则作废 二、包器材 封口膜通空气不通细菌 牛皮纸或报纸 加盖后几个包在一起 接种环包牛皮纸 P20 ①分装：注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，因此在将培养基转移到三角瓶或试管中时必须用__________。 ②加塞：试管用塑料盖或________；三角瓶口用_______ 或_________封口,再用_________或报纸封口。 ③包扎：用________或报纸 三角漏斗 棉花塞 封口膜 6层纱布 牛皮纸 牛皮纸 250ml装50ml 三、灭菌 定义：以化学剂或物理方法消灭所有微生物（包括芽孢(休眠体)和孢子（真菌、放线菌生殖细胞）） 方法1：高压蒸汽灭菌：100kPa、121 ℃下维持15min（培养基、无菌水、玻璃器皿等灭菌。P20），灭菌前排出锅内冷空气，因为空气膨胀压大于水蒸气膨胀压，达不到水蒸气的温度。灭菌锅压力与大气压相同时打开锅盖 灭菌后，通常将实验用具放进60～80℃的烘箱中烘干，除去灭菌时的水分，防止污染(P20) 方法2：干热灭菌：160-170 ℃下加热1-2h。玻璃器皿等耐热器具 恶劣环境下 四、超净台操作 无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止________污染（培养基和操作者）的方法。 杂菌 1、紫外消毒（针对空气）：实验用具放在超净台上，打开超净台的紫外灯和过滤风（人离开）30min左右，培养基冷却至60℃，关闭紫外。 2、酒精消毒：用镊子取出酒精棉擦拭超净台桌面，并擦拭双手。 3、开始实验 _________必须无菌（灭菌） _________也必须要无菌（灭菌） _________时不带入杂菌（灭菌、消毒 各种器具 培养基 转移菌种 灭菌与消毒的区别 灭菌与消毒的区别 消毒：使用较温和理化因素，仅杀死物体表面或内部的一部分对人体有害的微生物的过程。不能杀死芽孢