植物细胞培养反应器.pptVIP

第三章  植物细胞（组织）培养反应器 背景 直接从植物中提取有效成分不但占用大片的耕地，而且还可能造成一些珍贵的植物种类的灭绝。 例如：为了获得抗癌药物紫杉醇原始的做法是从红豆杉的树皮中提取。红豆杉生长缓慢，提取1 kg紫杉醇需要1 000棵生长了100年的红豆杉 。按照这种提取方法红豆杉很快就会从地球上消失。 表1 植物细胞培养和从完整的植物 生产紫草宁的比较 ? 第一节 植物细胞培养反应器 植物细胞培养：是指在离体条件下将愈伤组织或其他易分散的组织置于液体培养基中，将组织振荡分散成游离的悬浮细胞，通过继代培养使细胞增殖来获得大量细胞群体的方法。 一、植物细胞培养基本概念 1、植物细胞全能性：植物的每个细胞都包含着该物种的全部遗传信息，从而具备发育成完整植株的能力。 2、植物组织和细胞培养：在无菌和人工控制营养的（培养基）及环境条件（光照,温度等）下，研究植物的细胞，组织和器官及其生长发育的技术。 3、外植体：由活植物体上切取下来以进行培养的那部分组织器官称外植体。 4、俞伤组织培养：将外植体接种在人工培养基上，由于植物生长调节剂的存在，使细胞分化成愈伤组织。 5、继代培养：有最初外植体上切下的新增殖的组织，培养一代称：第一代培养。连续多代的培养叫做继代培养。(外植体在培养3周左右必须转换至新鲜的培养基上，以保持培养物正常生长。一个外植体经过一定次数的继代，其培养物就可以用于悬浮培养。 致密，多次继代变松散，才能进行悬浮培养。) 3周→新培养基（反复多次）→至愈伤组织由致密变松散→悬浮培养。 5、悬浮培养：保持较好分散性的离体细胞或较小细胞团的液体培养。 6、无性繁殖系：用母体培养物反复进行继代培养，通过外植体而获得越来越多的无性繁殖后代。 二、培养用植物细胞的准备： 1、植物材料（外植体的准备）：来自温室或大田的种子器官组织，往往携带菌 2、消毒： 次氯酸钙：9-10% 去除：易。效果：好 ； 氯化汞：0.1-1% 去除难 2-10MIN 效果：最好 3、植物激素：2，4-D（二氯苯氧乙酸）植物生长素，6-BA（6-苄氨基嘌呤）细胞分裂素 4、外植体培养与继代培养： 5、培养条件： 温度：25度。 光照周期：（16/8） 湿度：70％一80％的相对湿度 三、植物细胞培养过程的特点 1、培养液中植物细胞的特性 植物细胞比微生物细胞大 植物细胞通常以细胞数在2-200之间、直径为2mm左右的非均相集合细胞团方式存在 植物细胞抗剪能力弱? 2、细胞培养液的流变学性质 植物细胞培养液的粘度随着细胞浓度的增加而显著上升 3、植物细胞培养过程中的氧传递 所有植物细胞都是好气性的，需要连续不断地供氧。 二氧化碳的浓度对细胞的生长也相当重要。 4、泡沫和表面粘附性 气泡较大，覆盖有蛋白质和粘多糖，粘性大，易粘附于培养液表面以上的器壁上 5、悬浮细胞的生长与增殖 细胞数量随时间的变化曲线呈现“S”形。 细胞生长经历：延迟期、对数生长期、直线生长期、减慢期和静止期。 多数存在胞内 7、悬浮培养的优点 增加培养细胞与培养液的接触面 及时带走培养物产生的有害代谢产物 保证了氧的充分供应 四 、植物细胞培养反应器 培养方式： 悬浮培养和固定化细胞培养 1、悬浮培养生物反应器 (1)机械搅拌式反应器 优点:是能够获得较高的溶氧系数。 植物细胞培养的首选反应器 剪切力敏感的细胞不适用于传统的搅拌式反应器。为此，可以改变搅拌形式、叶轮结构与类型等方式减小因搅拌而产生的剪切力，并使其具有缓和的流场及良好的混合性能， 另有平叶涡轮、方框型、蝶型涡轮等不同形式的搅拌桨用于植物细胞培养的生产和研究，结果证明不同叶轮产生剪切力不同，一般认为涡轮状叶轮好于平叶轮，而平叶轮好于螺旋状叶轮。因此通过改进搅拌桨结构和类型可使植物细胞的生长不受损害，并能提高搅拌式生物反应器的应用范围。 2、固定化细胞生物反应器 为什么说植物细胞固定化培养更有利于次生生物的生成？ 由于固定化植物细胞培养比自由悬浮细胞培养具有较高的机械稳定性、产率，更长的稳定（生产期）等许多优点，因此，通常采用固定化来进行植物细胞的培养。这类培养包括了植物细胞和原生质体的固定化培养。 细胞固定化：是将细胞包埋在惰性支持物的内部或贴附在它的表面。其前提就是通过悬浮培养获得足够数量的细胞。 固定化培养一般只适用于那些能大量把产物分泌导胞外的培养系统。 图12-2大规