实验七外植体的分离、接种和培养.ppt

实验七 外植体的分离、接种和培养 1、实验目的： 掌握外植体材料的选择、灭菌的化学药剂、灭菌消毒时间及操作方法，以及接种操作技术。 2、实验材料 香石竹 实验步骤 1、外植体的选取、分离 选取健康无病虫害的部位。 2、外植体的消毒 选好的外植体现进行流水冲洗1h左右。然后放到灭好菌的超净工作台上进行表面灭菌，一般流程为：70%酒精→无菌水冲洗3～5次→0.1升汞→无菌水冲洗3～5次，然后用于接种。 3、培养基配制 MS+1mg/LBA+0.2mg/LNAA 4、接种 用经过灭菌的剪刀或手术刀将外植体切割成0.5cm2大小的小块置于经过灭菌的培养皿中，打开培养瓶用经过灭菌的镊子将外植体置于培养容器内，让外植体与培养基紧密接触，然后封上封口膜，写上接种日期和外植体名称即转入培养室内培养。 (1)接种员先洗净双手，在缓冲间换好专用实验服，并换穿托鞋等； (2)上工作台后，用酒精棉球擦拭双手，特别是指甲处。然后擦拭工作台面； (3)先用酒精棉球擦拭接种工具，再用酒精灯灼烧； (4)接种时，接种员双手不能离开工作台，不能说话、走动和咳嗽等； (5)接种完毕后要清理干净工作台，可用紫外灯灭菌30min。若连续接种，每5天要大强度灭菌一次。 实验八 继代培养 实验目的 使学生通过练习，熟练掌握继代培养的操作要领。 2、实验材料 香石竹无菌苗 实验步骤 （1）增殖培养基的配制：MS+2mg/LBA+0.5mg/LNAA （2）培养基的高压灭菌：根据培养基的用量选择灭菌的类型。灭菌条件为121℃，15min。同时，将接种用具（镊子、剪子、解剖刀、培养皿等）一起灭菌。 （3）接种：将配制好的培养基及需要继代的组培苗都放到超净工作台上，进行紫外灭菌，时间为20min，然后吹风20min。进行继代接种。a、在无菌条件下，用无菌的镊子（或接种针）从培养瓶中取出香石竹芽丛，将它们放在无菌的培养皿中。 b、用无菌解剖刀把每块芽丛分割成若干小份，去掉黄叶。c、用无菌镊子将小芽丛放入新鲜的培养基上，每瓶（或管培养基可以放3丛，盖上盖子）（或塞上塞子）后置于培养室中继代培养。 实验九 生根培养 1、实验目的 使学生通过练习，熟练掌握组培苗生根培养的要领及注意事项。 2、实验材料 香石竹组培苗 3、实验步骤 1）生根培养基的制作。 生根培养基基配制时可配制1/2MS，另加IBA0.2/L。 2）生根试管苗的接种和培养。 于超净工作台上打开种苗瓶，对瓶口先外壁，后内壁过火。然后准备接种：先将种苗移到培养皿里。对香石竹可切割茎段，剪时要茎节上部少留，节下部多留。每瓶可接3个左右茎段或小芽，接好后，瓶口和封口膜均要过火，扎口。每接完一瓶，接种工具要放回酒精消毒瓶。 3）培养观察。 培养时，注意观察生根情况，约20天后开始分化生根，以出现长度在1cm、洁白均匀整齐的不定根为佳。不要使根发生徒长现象。 * *