探讨环孢素导致小鼠牙龈增生的机制课件.pptVIP

探讨环孢素导致小鼠牙龈增生的机制 小组成员 马晓敏 叶韵瑶 刘开蕾 张峰林 肖静 牙龈增生 牙龈增生(gingival hyperplasia，GH)是牙周组织的异常增殖，其临床症状有疼痛、触痛、出血、语言障碍、咀嚼异常、咬合困难以及影响美观等。 导致GH的因素最常见的有急、慢性炎症、激素失调、抗坏血酸的缺乏、白血病引起的非特异性增生等。药物所致的非炎症性增生也是原因之一，过去，人们只认为苯妥英是导致GH的唯一药物，但近10多年来，抗癫痫类药物、钙拮抗剂以及环孢素(cyclosporine，CsA)所致的 GH已相继有多例报道，且已为多数病例充分肯定为GH的原因。本实验旨在探讨CsA对牙龈增生的影响。 环孢素 环孢素(CyclosporineA,CsA) 是一种高效免疫抑制剂,广泛用于预防和治疗组织器官移植后的排斥反应及某些自身免疫性疾病的治疗． 在该药的临床应用中,可产生一定的肾毒性,肝毒性和神经毒性等副作用.其主要的不良反应之一是引起牙龈增生(drug-induced　gingival　overgrowth,　DGO),文献报道发病率为25%~70%． 我们通过5-溴-2-尿嘧啶核苷(5-brmo-2-deoxyuridine,BrdU)染色,观察服用CsA的小鼠牙龈上皮细胞的生长周期,以了解CsA对牙龈上皮细胞增殖和生长周期的影响,同时,将牙龈上皮与腭黏膜上皮作比较,以了解CsA对牙龈组织的作用. 目的 观察环孢素(CsA) 对小鼠牙龈上皮细胞增殖和凋亡的影响,探讨环孢素导致龈增生的机制。 实验动物的选择与分组 体重为20～30 g 的健康雄性 小鼠40只 随机分为2 组,实验组、对照组各20只 主要试剂及仪器 环孢素(Cyclosporine A ,CsA) 5 - 溴- 2 - 尿嘧啶核苷(5 - bromo - 2 - deoxyuridine ,BrdU) 光学显微镜 实验方法 将CsA 溶于高质橄榄油中 实验组按CsA 30mg/ (kg·d) 胃饲;对照组同样按体重只给高质橄榄油胃饲。 给药后第8天腹腔注射BrdU 为每千克体重30mg ,1 h 后(此后每2 天) 颈椎脱臼法处死实验组和对照组小鼠各2只,取下前牙牙龈和腭黏膜标本,10 %中性甲醛液固定,石蜡包埋切片,BrdU 染色,镜下观察阳性细胞及分布。 BrdU标记原理 溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU） 是DNA前体胸腺嘧啶核苷类似物，通过竞争掺入S期细胞单链DNA核苷酸序列替代胸腺嘧啶。BrdU与胸腺嘧啶竞争掺入的强度可能与细胞增殖异常有关。通过统计BrdU细胞的数目和分布观察牙龈增生情况，探讨其机制。 预期结果 若第8天实验组与对照组阳性细胞数有明显差异，说明牙龈增生与细胞增值有关。 若第8天实验组与对照组阳性细胞数无显著差别，随时间推移，统计阳性细胞数实验组比对照组多，说明牙龈增生与细胞凋亡不足有关。 * *