第13章-紫外-可见分光光度法.pptVIP

一、 定性分析定性分析的依据：吸收光谱图 1.比较吸收光谱的一致性 比较两者吸收光谱图的一些特征，（如吸收峰数目和形状、最大吸收波长、摩尔吸光系数等）， 若两者完全一致，可初步判断是同一物质； 若两者吸收光谱不同可以肯定不是同一物质。 2.对比吸光度(或吸光系数)的比值 如果化合物有几个吸收峰，可用在不同吸收峰处(或峰与谷)测得吸光度比值作为鉴定依据 如维生素的吸收光谱有三个吸收峰，分别为278、361、550nm，它们的吸光度比值在1.70～1.88之间，在3.15～3.45之间。 二、 纯度检测 根据吸收曲线的特征可检查样品中有无杂质。如果待测物质在紫外可见光区没有明显的吸收，而杂质有吸收，那么根据吸收曲线可以检查出杂质。 例如：在乙醇或环己烷中含有杂质苯，苯在256nm处有吸收峰，而乙醇或环己烷无吸收，因此，若样品在256nm处有吸收峰时说明样品中含有杂质苯 三、 定量分析定量分析的依据是光的吸收定律 1.单组分的定量方法 定量依据：A=KCL （1）标准曲线法 （2）标准对照法 （3）吸光系数法 （1）标准曲线法----适合于批量分析和常规分析，操作繁琐 配制一系列(5～7个)不同浓度的标准溶液， 在λmax 处，以适当的空白液作参比液，逐一测定各溶液的吸光度A， 以溶液浓度c为横坐标，吸光度A为纵坐标，绘制A-c曲线，将得到一条通过原点的直线， 再在相同条件下，测定未知试样的吸光度，在标准曲线上可以找到与之相对应的未知试样的浓度 c样 C原样=C样×稀释倍数 A C C样品比色液浓度 （2）标准对比法----该法操作简便，但误差较大 在相同条件下，配制标准溶液和试样溶液， 在最大吸收波长处，分别测定两者的吸光度。 根据光的吸收定律： 标准对照法也可用于测定不纯试样的含量 将试样溶液和标准溶液配制成相同浓度，则c样=c标，在最大吸收波长处分别测定吸光度A，计算出试样的百分含量。 案例1 不纯的高锰酸钾试样与标准品高锰酸钾各取0.1000g，分别用1000mL容量瓶定容。各取10.00mL稀释至50.00mL，在最大吸收波长525nm处，测得 A 样=0.220、A 标=0.260，求试样中高锰酸钾的百分含量。 （3）吸光系数法 ---又称绝对法 是直接利用光的吸收定律A=KcL，，在手册或文献中查得E 1cm1%或ε，在最大吸收波长处测得某浓度下该物质的吸光度A，求该溶液的浓度 案例2 维生素B12的水溶液，在最大吸收波长361nm处， E 1cm1% =20.7，若测得溶液的吸光度0.621，吸收池厚度1cm，求该溶液的浓度。 案例3 已知苯胺最大吸收波长280nm ，ε=1430，将含有苯胺的化合物配制成1.00×10 -2mol/L的溶液，用1cm的比色皿测得A为0.500，求试样中苯胺百分含量。 2.多组分的定量分析法 双波长分光光度法 理论依据是：开始时，使交替照射到吸收池的两束波长分别为λ1和λ2的单色光的强度相等，待测组分对λ1和λ2的吸光度分别为A1和A2，背景吸收与光散射为As(因λ1和λ2接近，两波长下的As可视为相等)，则有： △A与溶液中待测组分的浓度c成正比。 等吸收点法 是指在干扰组分的吸收光谱上，选两个适当的波长λ1和λ2 ，干扰组分在这两个波长处具有相等的吸光度 以测定阿司匹林中水杨酸的含量为例 第六节 紫外-可见分光光度法的应用 一、 双硫腙法测定尿中微量镉 二、 原料药地高辛的含量测定 三、 全血中铁含量的测定 一、 双硫腙法测定尿中微量镉 将尿液标本处理后，于碱性溶液中应用二硫腙三氯甲烷溶液与镉离子反应，生成红色二硫腙镉化合物。二硫腙镉不溶于水，可溶于三氯甲烷中，故用三氯甲烷萃取后在有机相中进行分光光度法测定。λ max =520nm，ε=8.56 × 104。 用本法测定尿镉干扰较少，但应严格控制溶液的酸度，从反应式中可以看出，酸性增强，将促进配合物离解，影响测定结果 二、 原料药地高辛的含量测定 取在105℃经减压干燥1小时的地高辛原料药和标准试样，各精确称取相同质量，用体积分数0.70的酒精溶解并定容。再各精确量取相同体积，分别加入相同量的新配制的碱性三硝基苯试剂，在484nm处测定各自的吸光度，求出地高辛含量。 三、 全血中铁含量的测定 全血中铁的测定需要先将各种形式的铁转化为游离的铁离子。通常用消化法，得到游离,蛋白质用钨酸沉淀除去，取无蛋白的滤液，在一定条件下加KSCN显色剂，生成血红色配合物，在520nm波长处测定吸收度，与标准溶液比较，求出含量。 目标测试 1.偏离光的吸收定律主要原因是什么？在定量分析中如何来控制测量条件？ 2.何为标准曲线？它与吸收光谱图有何异同点？