溶血性贫血的实验室检查_2课件.ppt

（三）酸溶血（Hams）试验 实验原理 PNH患者体内存在对补体敏感的红细胞。Hams试验即红细胞在酸性（PH6.4-6.5）的正常血清中孵育，补体被激活，PNH红细胞破坏而产生溶血，而正常人RBC不被溶解，无溶血现象。 试剂 1. 1/6N HCL 2. 8.5g/L NaCl溶液 样品要求 1. 机械抗凝静脉血5ml，用0.9%NaCl洗涤 数次，取RBC备用（需同时用同型或O型正常人对照）。 2. 静脉血2ml分离出血清备用 操作程序 1.? 取两支小试管分别注入患者血清0.25ml 2. 一管加入患者50%的RBC悬液0.0125ml，再加入1/6 N HCL0.025ml 3. 另一管加正常人同型或者O型者50%的RBC悬液0.0125ml，加入1/6 N HCL0.025ml 4. 以上两管充分混匀，加棉塞于37℃温箱中一小时观察有无溶血现象（可离心后观察）  参考值 正常人 阴性 临床意义 本试验阳性主要见于PNH，确诊意义大。某些自身免疫性溶血性贫血发作严重时可呈阳性 （四） 热溶血试验 实验原理 利用患者的红细胞在其自身的血清（含补体）中于37℃孵育后，由于葡萄糖分解产酸使血清酸化，从而导致溶血的发生。 样品要求静脉血3ml（分成两管） 操作程序 取静脉血3ml，注入两支小试管中（各加入1.5ml），倾斜放置，一管置于室温，另一管放37℃温箱中，4h，6h，12h，24h，观察有无溶血现象（可离心观察）。 参考值 阴性 临床意义 阳性见于PNH。遗传性球形红细胞增多症和自身免疫性溶血性贫血亦可阳性，但阳性率比PNH为低。本试验用于PNH筛选试验。 （五） 蔗糖溶血试验 实验原理 在离子状态蛋白质结构发生某些变化，RBC与血清免疫球蛋白之间发生抗原抗体反应，被补体包围，PNH患者RBC由于膜结构异常，在有补体情况下，容易破坏，发生溶血。 试剂 1. 蔗糖 2. 3.8%枸橼酸钠溶液 样本要求 枸橼酸钠抗凝静脉血2ml（ 3.8%枸橼酸钠与静脉血比为1：9） 操作程序 将一份枸橼酸钠全血加入9份新鲜配制的糖水中（即0.5g蔗糖+4.5ml蒸馏水+0.5ml抗凝血，或10%蔗糖水5ml+0.5ml抗凝血），混合后，置37℃温箱中孵育30分钟，离心沉淀。 结果分析 如有溶血蔗糖液为红色，即为阳性。 参考值 正常为阴性  临床意义 PNH患者蔗糖溶血试验为阳性或溶血率增加，可作为PNH的筛选试验。自身免疫性溶血性贫血有的可为阳性，白血病、骨髓硬化时可出现假阳性。 （六）尿含铁血黄素试验 （Rous试验） 实验原理 当血红蛋白通过肾滤过时，部分铁离子以含铁血黄素的形式沉积于上皮细胞，并随尿排出。尿中含铁血黄素是不稳定的铁蛋白的聚合体，其中的高铁离子与亚铁氰化钾作用，在酸性环境下产生普鲁士蓝色的亚铁氰化铁沉淀。尿沉渣肾小管细胞内外可见直径1-3μm的兰色颗粒。 试剂 1. 2% 亚铁氰化钾水溶液：用时新鲜配制。 2. 3%盐酸 样品要求 新鲜晨尿10ml 操作程序 1.??取新鲜尿离心沉淀，去掉上清液。 2.??取等量的2%的低铁氰化钾和1/5 N HCL混合。 3.?将管（2）之酸性低铁氰化钾注入尿的沉渣试管中混合，在室温中静置10-20分钟，离心沉淀取沉渣镜检。 结果分析 如有兰色颗粒则为阳性。 参考值 正常人为阴性 临床意义 Rous试验阳性提示慢性血管内溶血，尿中有铁排除出。无论有无血红蛋白尿，只要存在慢性血管内溶血如PNH，本试验结果即呈阳性，并可持续数周。但在溶血初期，虽然有血红蛋白尿，上皮细胞内尚未形成可检出的含铁血黄素，此时本试验可呈阴性反应。 （七） 红细胞形态观察（涂片、染色、镜检） 成熟红细胞的形态观察对诊断溶血性贫血具有重要意义，它可为本病的诊断提供重要的线索和根据；如遗传性球形红细胞增多症时可达20-30%以上，严重者可达100%；遗传性椭圆形红细胞高达50-90%；靶形红细胞主要见于地中海贫血和其他血红蛋白病。某些获得性贫血如自身免疫、感染、理化和机械因素所致的溶血性贫血，亦可因红细胞损害而出现红细胞形态改变，其中最主要的为出现球形红细胞和红细胞的碎裂现象。 （八）网织红细胞检验 概述 网织红细胞是介于晚幼红细胞和成熟红细胞之间，尚未完全成熟的红细胞，因网织红细胞胞质内