实验动物学免疫缺陷动物及应用课件.ppt

移植性人体肿瘤模型 使得在动物体内直接研究人类肿瘤成为可能 人类肿瘤移植性动物模型是肿瘤研究最理想的工具之一 与临床肿瘤病人实际情况存在一定差距 有些实验研究应慎重选择肿瘤动物模型 人类肿瘤移植性动物模型的建立 观 察 项 目 生物学特性 组织病理学 染色体分析 肿瘤标志物 肿瘤模型不同方法的探讨 肿瘤的移植方法 组织块移植法：选择生长良好，无液化坏死、鱼肉状的瘤组织块进行接种。尽可能在切除后1小时内接种 悬液移植法：选取良好的瘤组织，加生理盐水或细胞培养液在匀浆器内研磨制成悬液后，接种于裸鼠皮下等部位 细胞移植法：取处于生长旺盛的细胞进行移植，细胞浓度调整为1×106～1×107/ml，按每只裸鼠0.2ml注射 皮下移植 爪垫接种 原位移植 皮下移植 转移过程 完整 完整 临床符合性 符合 不符合 筛选难度 易 难 实验操作 复杂 简单 实验观察 难 易 长期保种 难 易 重复性 较差 较好 应用范围 基础研究 基础、应用 两种移植性肿瘤模型的比较 几个相关问题 不是所有人类肿瘤细胞系(株)都能在免疫缺陷动物体内成瘤 同一肿瘤不同细胞系(株)在免疫缺陷动物体内成瘤及生长情况也不相同 肿瘤生长与肿瘤本身生物学特性，移植的部位或途径以及受体动物等相关 肿瘤转移途径 肿瘤转移动物模型 实验转移肿瘤模型 尾静脉→肺 脾→肝 足垫→淋巴结 左心室→骨 自发肿瘤转移模型 皮下移植（如：Lewis肺癌） 原位移植（肝→肺 胃、肠→肝） 高转移模型筛选 体外筛选： 克隆培养（分亚系） 荷电量（电泳） 迁移力（生物膜） 转染与癌转移相关的基因 体内筛选： 皮下、原位 转移灶 扩增 SPC-A-1sci-GFP/Luc 原位移植模型的高转移筛选肝转移灶→皮下移植（扩增）→胃原位 每次筛选传代不少于6只动物 高转移模型的验证 体外验证 细胞增殖能力 损伤愈合试验 迁移试验、侵袭实验 黏附实验（同质、异质） 体内验证 转移特性验证 病理学观察 肿瘤转移模型的比较医学 就肿瘤转移的研究而言，体内模型优于体外模型，自发性转移模型优于实验性转移模型，人体肿瘤模型优于动物源性肿瘤模型，原位移植高转移动物模型优于皮下移植高转移动物模型 临床上癌的转移以淋巴道转移为主，而肉瘤的转移则以血道转移为主。但是现在已建的肿瘤转移动物模型大多以血道转移为主，只有部分模型伴有淋巴道转移 肿瘤移植性转移动物模型特别是自发性转移动物模型较好地表达了恶性肿瘤包括转移在内的生物学特性，但是没有表现出肿瘤的发生情况 人体肿瘤转移免疫缺陷动物模型得出的实验结果只能提供参考，并不能代表临床的实际状况 转基因肿瘤动物模型 定义：通过重组DNA技术将外源性肿瘤基因或相关基因导入动物染色体基因组，使之稳定表达并能遗传给后代的一类肿瘤动物模型 目前已建立的模型以小鼠为主 显微注射法、精子载体法、电穿孔法、胚胎干细胞介导法、反转录病毒感染法等 转基因动物模型的比较医学 能较好地再现自然条件下肿瘤发生发展的完整过程，与临床人类肿瘤相关性好 实验周期长、肿瘤均一性差、实验成本高 部分动物繁殖能力低、纯合子不易存活、保种传代困难 欢迎联系 闫明霞 单位:上海市肿瘤研究所 癌基因及相关基因国家重点实验室 电话邮箱:mingxiayan@ 免疫缺陷动物及应用 上海市肿瘤研究所 癌基因及相关基因国家重点实验室 闫明霞 1962 1966 1968 Grist 无毛小鼠 Flanagan 无毛基因nu Pantelouris 无胸腺 免疫缺陷动物发展史 免疫缺陷动物是指由于先天性遗传突变或人工诱导造成一种或几种免疫系统功能缺陷的动物，目前已成为肿瘤学、免疫学、遗传学、病原生物学和细胞生物学等研究的重要工具 免疫缺陷动物分类 先天性免疫缺陷动物 获得性免疫缺陷动物 裸小鼠、裸大鼠 Beige小鼠 CBA/N小鼠 SCID小鼠 NOD/SCID小鼠 BNX小鼠 转基因免疫缺陷小鼠 AIDS模型 免疫抑制、营养不良、恶性肿瘤、病毒等 裸小鼠 (T cell-) BNX (T/B/NK cell-) NOD/SCID (T/B/NK cell-) 免疫缺陷动物 SCID (T/B cell-) 裸小鼠 先天性胸腺发育缺陷，无被毛，T细胞功能缺失 nu基因为隐性突变基因，位于11号位染色体上 应用：微生物、免疫学、遗传学、寄生虫、临床医学、肿瘤学等方面研究 裸小鼠的繁育 nu + nu nu/nu nu/+ nu