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载脂蛋白E基因多态性与2型糖尿病患者血脂关系 　　1.内蒙古大学生命科学学院，内蒙古呼和浩特 010021；2.内蒙古包钢医院老年保健科，内蒙古包头 014010 　　[摘要] 目的 研究中国北方汉族群体载脂蛋白E（ApoE）基因多态性与2型糖尿病患者血脂水平的关联。 方法 选择2型糖尿病患者200例作为病例组，健康个体210例作为对照组，采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）技术检测ApoE基因型，全自动生化分析仪检测血清总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平。 结果 病例组ε3/4基因型分布频率显著高于对照组（36.50%比22.38%，χ2=9.864，P 　　[Key words] Type 2 diabetes； Apolipoprotein E； Gene polymorphism； Lipid metabolism 　　[作者简介] 葛彪（1978.5-），男，硕士研究生；研究方向：糖尿病病因学。 　　[通讯作者] 阿拉坦高勒，男，博士，教授；研究方向：生物化学与分子生物学。 　　2型糖尿病是多种致病因子作用于机体导致的胰岛功能减退与胰岛素抵抗，进而引发糖、脂肪、蛋白质及电解质代谢紊乱综合征，该病以其高发病率、高致残致死率及发病年龄年轻化而备受关注。2型糖尿病病因学涉及遗传因素、免疫功能紊乱、微生物感染、毒素、自由基及精神刺激等多方面。近年来，该病的遗传学说被广泛认可并深入研究。大量临床实践与病例对照研究显示，2型糖尿病具有家族聚集倾向，有患者的家族其亲属发病率较正常人群显著增高；而在遗传学方面已经克隆或在染色体上定位了诸多易感基因。载脂蛋白E（Apolipoprotein E，ApoE）是已被证实的疾病易感基因之一。 　　本研究以中国北方汉族健康者与2型糖尿病患者为受试对象，对上述人群ApoE基因型及血脂水平进行分析，以期阐明具有区域特色的ApoE基因多态性与2型糖尿病血脂水平及发病的相关性。 　　1 对象与方法 　　1.1 主要试剂 　　PCR聚合酶购自北京康为世纪生物科技有限公司；限制性内切酶Hha Ⅰ购自大连宝生物工程有限公司；蛋白酶K购自Sigma公司；其余分析纯试剂均购自Amresco公司；PCR引物委托上海生工生物工程公司合成。 　　1.2 受试对象 　　经我院伦理委员会批准，选择2012年1月～2013年3月在我院住院治疗的2型糖尿病患者作为病例组，所有病例均符合世界卫生组织关于2型糖尿病的诊断标准，同时选取我院门诊体检健康个体作为对照组。病例组200例，男115例，女85例，平均年龄（48.9±9.9）岁；对照组210例，男118例，女92例，平均年龄（49.4±9.7）岁。两组的性别及年龄构成差异无统计学意义（P 0.05），具有可比性。所有受试对象均于采集血液前签署知情同意书。 　　1.3 样品准备 　　所有受试对象均空腹12 h后于次日清晨抽取静脉血2 mL，枸橼酸钠抗凝。4℃下1300 r/min 离心15 min，分离血清与白细胞，置于-80℃超低温冰箱保存备用。血清进行血脂水平检测，白细胞采用常规SDS-蛋白酶K/酚-氯仿法提取基因组DNA。 　　1.4 血脂水平检测 　　采用Olympus AU400 全自动生化分析仪进行血脂水平检测，检测指标包括：总胆固醇（total cholesterol，TC）、三酰甘油（triglyeride，TG）、高密度脂蛋白胆固醇（high density lipoprotein-cholesterol，HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein-cholesterol，LDL-C）。 　　1.5 ApoE基因多态性分型检验 　　采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism， PCR-RFLP）技术对ApoE基因行多态性分型检验，上游引物：5-AACAACTGACCCCGGTGGCG-3；下游引物：5-ATGGCGCTGAGGCCGCGCTC-3。PCR反应体系总体积20 μL，含ddH2O 7.4 μL、2×Es Taq MasterMix 10.0 μL、10 μmol/L上下游引物各0.3 μL、50 ng/μL基因组DNA 2.0 μL。PCR反应在TaKaRa的TP650扩增仪上进行，循环参数如下：94℃ 2 min；94℃ 30 s，65℃ 30 s，72℃ 30 s，循环35次；72℃ 2 min延伸。取PCR产物2.0 μL，0.5 μL限制性内