雄激素受体敲除小鼠睾丸生精功能变化及p63表达.docVIP

雄激素受体敲除小鼠睾丸生精功能变化及p63表达 　　[摘要] 目的 研究雄激素受体（AR）敲除小鼠睾丸生精功能及p63在曲细精管中表达的改变。 方法 采用雄性Flox-AR小鼠与雌性ACTB-Cre小鼠交配，并敲除胚胎中AR，筛选AR敲除（AR敲除组）和AR未敲除（对照组）雄性小鼠各10只，对比睾丸曲细精管生精功能及p63的表达。 结果 两组小鼠曲细精管内径、管周膜厚度、管壁生殖细胞层数、生殖细胞成熟度评分及总Makler评分之间差异均有统计学意义（P 　　[关键词] 雄激素受体；基因；p63；生精功能 　　[中图分类号] R698.2 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2013）34-0001-03 　　The testicular spermatogenic function and expression of p63 in androgen receptor knockout mouse 　　ZHENG Chunwei CHEN Yu FENG Yibo HUANG Qiang 　　Laboratory Animal Center of Zhejiang Province Traditional Chinese Medicine Academy， Hangzhou 310007， China 　　[Abstract] Objective To study spermatogenesis and p63 expression in the seminiferous tubules of the testicular androgen receptor （AR） knockout mice. Methods Male Flox-AR mice mated with female ACTB-Cre mice， and knocked the AR in addition to embryos， screening AR knockout male mice （ARKO group） and AR did not knock （control group），each of 10 mice. Contrasted testis seminiferous tube spermatogenic function and p63 expression. Results The differences of seminiferous tube diameter， the peritubular film thickness， wall germ cell layers， the germ cell maturity score and Makler score between two groups were statistically significant （P 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　雄性Flox-AR小鼠，由美国罗切斯特大学医学中心张传祥教授实验室提供[6]；雌性ACTB-Cre小鼠，由美国JAX实验室提供。小鼠抗人p63单克隆抗体、S-P试剂盒及DAB显色试剂盒均购自福州迈新生物技术开发有限公司。 　　1.2 方法 　　按Flox-AR小鼠与ACTB-Cre小鼠交配。采用Cre-lox法[7]敲除胚胎中小鼠AR。取子代小鼠尾巴组织标本，通过PCR检测基因型，选择AR敲除的雄性小鼠10只作为AR敲除组，AR未敲除雄性小鼠10只作为对照组。至10周龄称重后以5%CO处死，均取右侧睾丸，4%中性甲醛液固定，梯度酒精脱水，石蜡包埋，切4 μm薄片，脱蜡，水化，采用p63鼠单克隆抗体以S-P免疫组织化学染色法进行组织p63染色，操作均按试剂盒说明进行。DAB显色，冲洗，苏木精复染，以PBS代替一抗作阴性对照。置于高倍光学显微镜下观察，p63主要定位于细胞核，细胞核呈棕黄色则为p63阳性。随机选取视野内10个睾丸曲细精管断面，观察p63表达，测定曲细精管内径、管壁生殖细胞层数目、管周膜厚度、生殖细胞成熟度。 　　1.3 判断标准 　　睾丸生精功能采用Makler评分法[8]测定，曲细精管内径、管壁生殖细胞层数目、管周膜厚度、生殖细胞成熟度，每项分为0～5分，满分20分，得分越高功能越正常。p63表达强度采用半定量的免疫组织化学积分法（HSCORE）[5]，公式：HSCORE=∑Pi（i+1）。染色强度的主观评估（i）由无染色至强染色分为0～3分，Pi为每个细胞中的强度百分比。 　　1.4 统计学处理 　　数据采用SPSS17.0进行统计学分析，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，采用t检验，相关性采用Spearman等级相关分析，P 　　[2] Xia Y，Che