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针刺任督脉对脑缺血再灌注大鼠血管内皮生长因子和CD34表达影响 　　[摘要] 目的 探讨任督脉经穴针刺对脑缺血再灌注大鼠脑内血管内皮生长因子（VEGF）和CD34蛋白表达的影响。 方法 将雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和针刺任督脉组，每组又随机分为7、14 d和28 d各三个亚组。线栓法制作大鼠大脑中动脉栓塞（MCAO）模型。假手术组切开后不插线直接缝合。利用免疫组化法检测7、14 d和28 d大鼠脑内VEGF和CD34蛋白的表达情况。 结果 大鼠MCAO后模型组和针刺任督脉组VEGF和CD34蛋白表达均增加，其中，模型组VEGF表达在7 d为最低（169.97±2.42，P 　　[关键词] 针刺；任督脉；缺血性中风；血管内皮生长因子；CD34 　　[中图分类号] R245 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2013）09（a）-0018-03 　　脑缺血再灌注后，脑血管新生在脑组织损伤后结构重建和神经功能恢复中发挥着重要作用。针刺任督脉经穴对脑缺血的治疗作用有多靶点、多层次、多水平等特点，对脑缺血后神经再生具有积极的效应[1]。基于前期研究基础，本研究拟观察针刺任督脉经穴对脑缺血血管内皮生长因子（VEGF）蛋白和CD34表达的影响，探讨针刺任督脉经穴治疗脑缺血再灌注的可能作用机制。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验动物 　　成年健康雄性SD大鼠54只，体重（220±20）g，由广东省实验动物中心提供，许可证号：SCXK（粤）2008-0002。大鼠饲料为广东省实验动物中心提供的富含多种成分的配方。饲养于深圳市中医院中心实验室提供的动物房，环境温度26℃，湿度6%。 　　1.2 大鼠MCAO模型的建立 　　参考Kuge等[2]造模法，按300 mg/kg水合氯醛腹腔麻醉，消毒剃毛后在蔡司体视显微镜下，锐钝结合分离皮下组织，暴露右侧颈总动脉（CCA）、颈外动脉（ECA）、颈内动脉（ICA），应用日本制尼龙线（直径0.205 mm）插入ICA阻断CCA血流，缺血2 h后拔出线栓形成缺血再灌注。再灌后参考Longa神经病学评分[3]评定大鼠神经功能缺损，评分为1～4分则表示造模成功，可用于实验。 　　1.3 实验动物电针方法 　　针刺任督脉组大鼠在术后第2天起给予针刺，穴位选取任脉穴位承浆、气海、关元及督脉穴位百会、水沟和大椎，共6穴，穴位定位参照《实验针灸学》[4]中以???6个穴位取穴标记的方法，针刺后予SDZ-Ⅱ型华佗牌电针仪加电，疏密波刺激（疏波30 Hz，密波100 Hz），强度5 V，以身体相应部位出现轻微颤动为准。持续时间为20 min。假手术组和模型组大鼠于术后第2天将其同其余实验组大鼠般固定于针刺操作台上20 min，不给予针刺。每天1次，分别于术后的第7、14、28天处死。 　　1.4 取材 　　各组的大鼠在各个时间点经麻醉后，先予生理盐水心脏灌注，再予4%多聚甲醛心脏灌注后固定，冠状石蜡切片，片厚10 μm。微波炉抗原修复，兔抗VEGF一抗或兔抗CD34一抗（北京博奥森生物技术有限公司）4℃过夜，PBS冲洗，滴加即用型MaxvisionTM试剂，室温下孵育20 min，PBS冲洗，DAB显色，显微镜200×视野观察照相。 　　1.5 统计学方法 　　采用统计软件SPSS 12.0对实验数据进行分析，计量资料数据以均数±标准差（x±s）表示，采用单因素方差分析，组间比较采用q检验。计数资料以率表示，采用χ2检验。以P 0.05）。模型组和针刺任督脉组随着缺血再灌注时间的延长，其平均灰度值逐渐增多，模型组7 d时最低（169.97±2.42），14 d时增多（175.83±1.72），28 d时最高（179.00±2.19），同样的针刺任督脉组7 d时最低（155.50±2.70），14 d时增多（165.67±1.90），28 d时最高（169.83±2.40）。假手术组、模型组VEGF的表达在7、14及28 d差异均有高度统计学意义（均P 0.05）。模型组和针刺任督脉组在脑缺血再灌注7 d时其CD34表达平均灰度值明显减少，14 d时最低峰，28 d时又增多，提示与假手术组比较，模型组和针刺任督脉组CD34阳性细胞数明显增多，14 d时达高峰后逐渐减少，但相对于模型组，针刺任督脉组数值上有明显优势（P 　　3 讨论 　　脑缺血再灌注损伤后，及早恢复缺血半暗带区血供及促进新生的微血管和侧支循环的重建，有利于改善脑缺血情况，减少神经元凋亡坏死。因此，血管新生成为脑缺血后治疗的关键环节之一，可通过药物或其他途径促进缺血组织在原有微血管基础上形成新的毛细血管，并和原血管网相交汇以利于改善血供[5-6]。大量研究[7-8]表明，脑缺血缺氧可诱导VE