试验一黄柏中小檗碱的提取分离和鉴别.DOC

天然药物化学实验讲义 重庆医科大学药学院  目 录 一、黄柏中生物碱的提取、分离和鉴别 二、槐米中芦丁的提取与鉴提取与鉴挥发油的提取及鉴提取与鉴提取与鉴 前 言 《化学实验》是一门实践性很强的课程，理论教学与实验教学是一个不可分割的完整体系。通过实验课的学习使学生能印证并加深理解课堂讲授的理论知识，掌握由天然药物中提取、分离、精制有效成分，并对其进行鉴别的基本方法和技能，提高学生独立动手、观察分析、解决问题的能力，培养学生严谨的科学态度和良好的科研作风。 1.掌握从黄柏中提取小檗碱的原理和方法。 2.掌握小檗碱的理化性质和鉴别方法 3.熟TLC的基本操作以及在中药有效成分提取分离中的应用。 【实验原理】 1.小檗碱(berberine)，含量为1.4%-4%(川黄柏含量较高) 性状：黄色结晶，有5.5个结晶水，mp145℃。 溶解性：能缓缓溶于冷水中（1:20），微溶于冷乙醇（1:100），易溶于热水和熱乙醇，微溶或不溶于苯、氯仿和丙酮，硝酸盐极难溶于水，盐酸盐微溶于冷水（1:500）但较易溶于沸水，硫酸盐和枸橼酸盐在水中溶解度较大（1:30），盐酸小檗碱为黄色结晶，含2分子结晶水，220℃时分解并转变为棕红色小檗红碱，285℃时完全熔融。 2.小檗碱为季铵碱，其游离型在水中溶解度较大，其盐酸盐在水中溶解度较小。利用小檗碱的溶解性及黄柏中含黏液质的特点，首先用石灰乳沉淀黏液质，用碱水提出小檗碱，再加盐酸使其转化为盐酸小檗碱沉淀析出。 【实验仪器与试剂】 1.1000、500、100、10ml烧杯，10ml试管，试管架，托盘天平，量筒，瓶，布氏漏斗pH试浓硫酸 称取00g，加入1%硫酸00mL，搅拌均匀，浸泡过夜。称取00g，加入1%硫酸00mL，搅拌均匀，使湿润度合适，放置后，装入渗漉筒内，1%硫酸浸泡过夜渗漉，速度以5～6mL/min为宜。收集渗漉液500～600mL即可停止渗漉。加入石灰乳调H11～,静置沉淀，脱脂棉滤过，滤液浓盐酸调H2～3，再加入10%食盐，搅拌过夜，滤，得盐酸小檗碱粗精制 将盐酸小檗碱粗品25倍量沸水中，于水浴上加热使溶解，滤液HCI调pH2左右，静置，80℃以下干燥，得精制盐酸小檗碱。盐酸小檗碱的鉴别 （1）取盐酸小檗碱少许，加漂白粉少许，即显樱红色。 （2）取盐酸小檗碱少许，加稀酸2mL溶解，加浓硝酸1～2滴，即显樱红色。 （3）取盐酸小檗碱0.05g，溶于5mL热水中，加入10%NaOH溶液2mL，，加入丙酮mL，放置，有色丙酮小檗碱结晶析出。 （4）取盐酸小檗碱少许，加水mL溶解后，加锌粉少许，再分数次加入浓硫酸数滴，每隔10min加一次，观察其黄色是否消退。 薄层色谱鉴 吸附剂： 展开剂：样品：自制盐酸小檗碱醇液对照品：盐酸小檗碱对照品醇液显色： 【基本操作注意事项】 1.实验原料尽可能选用小檗碱含量较高的川黄柏，或小檗碱含量较低的关黄柏，后者粘液质较多过滤麻烦。 2.加入氯化钠的目的是将小檗碱转化成盐酸小檗碱并利用其盐析作用，降低其在水中的溶解度。其用量不宜过少，否则盐析效果不好，收率过低。 3.在精制盐酸小檗碱时，因为盐酸小檗碱几乎不溶于冷水，放冷易析出结晶，所以水浴加热溶解后，要趁热滤过，防止盐酸小檗碱在滤过时析出结晶，使滤过困难，产量降低。 【思考题】 1.怎样从黄柏中提取分离盐酸小檗碱？原理是什么？为什么加石灰乳？ 2.通过从黄柏中提取盐酸小檗碱，试述药材粉碎度等对提取的影响。 3.用薄层色谱法检识盐酸小檗碱时，选用氧化铝或硅胶作吸附剂，二者有何区别？展开剂有何不同？ 实验二 槐米中芦丁、槲皮素的提取、分离与鉴别 【实验目的】 1.掌握黄酮类化合物的提取原理和方法。 2.掌握黄酮类成分的主要理化性质及鉴别方法。 3.熟悉和了解采收与炮制对芦丁含量的影响。 【实验原理】 1.槐花为豆科植物槐Sophora japonica L．的干燥花及花莆。前者习称槐花Flos Sphorae；后者习称槐米Flos Sophorae Immaturus。主产于河北、山东、河南、陕西、江苏、广东、广西、辽宁等地。以河北、山东、河南产量大。 性能：苦，性微寒。功效：凉血止血、清肝泻火 。应用：用于便血、痔血、血痢、崩漏、吐血、衄血、肝热目赤、头痛眩晕等。 2.主要含有芦丁（芸香苷）、槲皮素，还含少量皂苷类及多糖、粘液质等。近代研究表明槐米含芦丁可高达23.5%，槐花开放后降至13.0%。芦丁可用于治疗毛细血管脆性引起的出血症，并用作高血压辅助治疗剂。芦丁还可以作为制备槲皮素、羟乙基槲皮素、羟乙基芦丁、二乙胺基乙基芦丁等的原料。 3.芦丁为浅黄色粉末或极细微淡黄色针状结晶，含3分子结晶水（C27H30O16·3H2O），加热至185℃以上熔融并开始分解。芦丁的溶解度，在冷水