血细胞分析仪检测技术及临床应用课件.pptVIP

血细胞分析仪检测是临床诊断工作中最常用的实验方法之一 40年代后期美国库尔特先生(W.H.Coulter)发明了粒子计数技术(电阻抗法),50年代初期应用于血细胞计数 血细胞分析仪检测原理 一.电阻抗法(库尔特原理) 1.血细胞具有非传导性质(不良导体) 2.E=I x R→脉冲信号 3.脉冲信号大小与细胞体积成正比 4.脉冲信号的多少代表细胞数量 细胞的三分群： 各种细胞在溶血剂中，经溶血剂中表面活性剂对细胞膜表面的脂蛋白作用后而分群，由于RBC膜表面的脂蛋白含量最少而易被破坏溶解,白细胞的细胞浆漏出，仅留下核与颗粒并使细胞缩小，原来最大的单核细胞经溶血剂作用后，体积就落在了小的淋巴和大的中性粒细胞之间，这样就按照溶血剂作用后体积大小，将白细胞分成三群。 淋巴细胞：35-90fl; 中间细胞：90-160fl; 粒细胞160fl 依照三群细胞在白细胞体积分布的直方图上所分布区域的面积，计算得出每群细胞的百分比，并依照白细胞计数总数，求得每群细胞的绝对值。 注意:各厂家的溶血剂配方不完全相同,对白细胞膜的作用程度不同,而各厂家对仪器的各类WBC区分设置也不尽相同. RBC及相关参数的检测 RBC检测→电阻抗原理 脉冲信号高度的叠加→HCT 单个脉冲信号高度的均值→MCV RBC:36—360fL区间分析 RDW:仪器将不同大小的脉冲信号分别贮存在不同通道,计算出相应的体积和数目,再统计处理得到RDW,用RBC体积的CV或SD表示. RBC计数中WBC含量可忽略不计,但在白血病或WBC异常增高时则对RBC及其相关参数有明显影响. PLT检测:电阻抗原理 PLT和RBC一起同时被检测 PLT体积分布:2—28fL,不同仪器的PLT直方图 范围不一. MPV:是PLT体积分布直方图的产物 MPV与PLT成非线性负相关 PCT参考范围是一不恒定参数 PDW:是PLT体积分布直方图的产物 PLCR:＞12fL的PLT比率 浮动界标技术 1.RBC/PLT : 为便于识别，在RBC/PLT通道一般把体积大于30f1的细胞计为红细胞(RBC)，而把体积小于30f1的细胞计为血小板(PLT)。一般的血细胞分析仪，PLT和RBC的分界点是固定的(例如30f1处)，这种情况属于固定界标。但也有例外的情况，有些公司的血细胞分析仪，可以把PLT和RBC的分界点人为地设置在5-30f1的范围内，在实测样本时，仪器根据PLT和RBC的分布曲线，自动在所设定的范围内寻找最低点，以得到正确的PLT. RBC及相关参数的结果，这就是浮动界标. 2.WBC : 当直方图出来后，由软件程序自动判别并寻找直方图上三个区域的起止点（即第一个高峰起止和第二个高峰地点）作为界标线，并以此为依据进行判读，由于设计理念的不同，稀释液和溶血剂对细胞的作用不同于固定界标，因此，浮动界标的wbc直方图很少有能超过350fl的横坐标。直方图每次的结果是不一样的，因此界标线的位置也是不一样，这就形成界标线的移动，就是浮动界标 Hb检测:与WBC一起被检测 SLS-HGB检测血红蛋白： 测定原理：亚铁血红素中的Fe2+离子被十二烷基磺酸钠氧化，形成SLS-HGB衍生物，在550nm波长进行比色测定。 SLS-Hb法测定与ICSH的参考方法相比，具有非常高的相关性(r=0.999)。 二.血细胞检测技术的发展（五分类） 1。光散射法(Scatter): 来自激光光源的单色光束在10°--70°对细胞进行扫描,提供细胞结构、形态的光散射信息。 光散射特别具有对细胞颗粒的构型和颗粒质量的区别能力，从而将三种粒细胞区分。 利用高低角度光散射可同时对PLT和RBC进行计数.高角(5-15°)测量RBC数,检测PLT内容物.低角(1-3°)检测RBC\PLT体积. 2。电导法 根据细胞壁能产生高频电流的性质采用高频电磁探针，测量细胞内部结构、核浆比、细胞内颗粒大小和密度。 电导法可辨别体积相同而性质不同的两个细胞群（如；小淋巴和嗜碱） 3。射频技术； 在测量小孔的内外电极装有直流和高频两个发射器，因此在小孔周围产生直流和射频两种电流，直流电仅能测量细胞大小，而射频可透入细胞内，测量核的大小及颗粒的多少。 利用阻抗+射频技术可将淋巴、单核、粒细胞区分。 4.过氧化物酶染色技术 过氧化氢酶含量:嗜酸粒细胞＞中性粒细胞＞单核细胞. 淋巴和嗜碱粒细胞无 由于酶反应阳性程度不同,通过激光束时的吸光度也就不同,加上光散射及特殊溶血剂的作用可进行五分类. 5.核酸荧光染色技术 利用聚次甲基荧光染色液对有核细胞