酵母菌的分离和培养条件的优化.ppt

6.4再次打开取样处放料阀处的蒸汽阀，对取样放料阀口再灭菌，保持时间10min后关闭两阀。 注意事项：若不需要取无菌样时，可不进行酒精火焰保护的操作。整个培养过程的总取样量一般不超过发酵液体积的10%，否则诸如氧传递速度等会受到影响。 7、出料 7.1调小罐面排气阀，调节进气阀，将罐压升至0.05MPa——0.1MPa之间。7.2打开底阀和放料阀，使发酵液通过放料管放到盛料容器或下一道工序。 7.3如发酵失败，必须将发酵液灭活后方可排除。 时间 PH值 原液OD 稀释10倍OD 残糖量 09:18 5 0、735 0、102 09:48 6 0、815 0、199 10:17 6 0、799 0、143 10:47 6 0、873 0、144 11:18 6 0、857 0、133 11:47 6 0、848 0、127 12:17 6 0、836 0、157 12:47 6 0、821 0、175 01:17 6 0、870 0、161 01:47 6 0、936 0、167 * 设计型实验 酵母菌的分离及培养条件的优化 一、目的要求 1、掌握培养基的配置及灭菌方法，能够正确的配制 培养基并在高压灭菌锅内进行灭菌。 2、熟知培养基成分的选择原则，能够对培养基的成分和配比进行优化设计。 3、掌握固体斜面、平板的制备技术，能够通过划线、涂布等方法分离菌种。 4、熟知影响酵母菌生长繁殖各种培养条件，能够对摇瓶培养条件进行优化设计。 5、了解酵母菌培养过程的代谢变化规律。掌握酵母菌培养过程参数的测定和分析方法。 二、基本原理 酵母菌是单细胞真菌生物，具有很高的营养价值，特别是含有较多蛋白质、B族维生素、核酸和矿物质，同时也能产生一些保健功能活性物。因酵母属于简单的单细胞真核生物，易于培养，且生长迅速，被广泛用于现代生物学研究中。是遗传工程研究过程中常用的受体菌种。从自然界或商品中分离纯的酵母菌株，通常采用平板或斜面涂布划线法。这两种方法简单有效，是实验室分离纯化菌种常用到的方法。 在发酵过程中定时地取样测定，包括对菌体进行镜检、测定不同时期发酵液的菌体浓度、残留的还原糖等参数，动态地了解发酵过程中过程变量的变化，分析菌体生长、基质消耗、产物生成的速度，研究发酵动力学，为生产中优化培养条件提供数据依据。 三、实验材料 （一）菌种：从安琪酵母中分离的酵母菌 （二）培养基 基础培养基YPD： 酵母浸粉1% 蛋白胨2% 葡萄糖 2% 固体培养 基再加琼脂2% 优化N源培养基： 酵母浸粉1% (NH4)2SO4 2% 葡萄糖 2% ； 酵母浸粉1% (NH4)2SO4 4% 葡萄糖 2% ； 酵母浸粉1% NH4NO3 2% 葡萄糖 2% ； 酵母浸粉1% NH4NO3 4% 葡萄糖 2% ； 酵母浸粉1% NaNO3 2% 葡萄糖 2% ； 酵母浸粉1% NaNO3 4% 葡萄糖 2% ； （三）仪器设备 超净工作台，756型分光光度计，旋转式摇床，恒温培养箱，全自动灭菌锅，三角瓶、涂布器、移液管、平皿等玻璃仪器。 （四）试剂 酵母浸粉、蛋白胨、葡萄糖、琼脂 (NH4)2SO4 2%、 (NH4)2SO4 4%、 NH4NO3 2% NH4NO3 4%、 NaNO3 2%、 NaNO3 4%等；裴林试剂甲液、裴林试剂乙液； NaOH溶液、HCl等。 四 实验内容 1、分离单菌落 （1）实验物品灭菌 仪器：包扎9个移液管、9个涂布器、9个装有9ml蒸馏水的试管、16个平板、 液体：3g酵母浸粉1%、6g蛋白胨2%、6g葡萄糖2%，配成300ml溶液，取240ml溶液平均分装两个三角瓶中，然后每个三角瓶放入2.4g琼脂，剩下60ml为液体培养基，然后将以上设备拿去灭菌 （2）划线涂布 超净台上： 1、把240ml的培养基分别倒入15个平板，每个平板为12~13ml，平板分别标10-2~10-10，还有倒一个斜面 2、取1ml的菌原液进行稀释梯度为10-3~10-10 3、划线涂布 划线为原液从10-2~10-7；涂布从10-3~10-10用对应的稀释梯度液，10-2用原液涂布 2、种子培养 挑取单菌落接至种子瓶，进行种子培养 培养条件：将250ml三角瓶装培养基60ml放入摇床，将转速为180r/min,温度为30度 培养时间:12月4号早上10:37到12月5号早上8:47十个小时左右 氮源的优化方案 1.常见的有机氮源:(NH4)2SO4.