RE56651_腮腺炎_IgM抗体检测试剂操作说明.doc.docVIP

腮腺炎 IgM ELISA试剂盒 （德国IBL：RE56651） 1、应用范围 此酶免试剂盒可用于人血清和血浆中腮腺炎IgG的定性和定量检测。 2、前言说明 腮腺炎是一种常见的传染病，儿童感染的症状相对较温和，成年人感染则越来越多的表现为并发症。腮腺炎的病原体是副黏液病毒科的一种病毒。腮腺炎感染或接种其疫苗都可产生终生免疫。腮腺炎的典型症状是腮腺肿大，而且还可能涉及到中枢神经系统和其它的腺体（胰腺、胸腺和甲状腺）。腮腺炎包括脑膜炎在内是腮腺炎病毒感染最常见的表现之一，而且脑膜炎在腮腺炎未出现的情况下也可以出现。已公布的关于脑膜炎的资料表明，脑膜炎的临床病例是1.4%到66%之间。大多情况下，腮腺炎感染的病人都会在不出现并发症的情况下逐渐康复。实验室中腮腺炎的鉴别大多通过检测病原体的本身或检测病毒的特异性抗体。其中血清学检测是主要的一部分。除了像补体结合实验、红细胞凝集实验、中和实验这样的传统方法外，现代的检测方法有免疫荧光、放免和酶免。我们可通过腮腺炎的IgG ELISA试剂盒来检测个体的免疫性。因为副流感病毒2的交叉反应可能导致病人的诊断报告错误，所以说IgG浓度的提高有助于病原体的检测。在疾病的早期阶段，我们可检测到较高的IgM浓度。 3、实验原理 此固相ELISA试剂盒利用的夹心法原理。包被板上包被了抗原。用对人IgM具有特异性的酶标二抗来检测结合到包被抗原的样品特异性抗体。底物反应后，所显示的颜色强度与检测到的IgM特异性抗体的量成正比。样品的结果可直接使用标准曲线得。 4、试剂盒组成： 4×2ml 标准品A-D 1；10；30；125U/mL，待用 标准品A=阴性质控 标准品B=临界质控 标准品C=弱阳性质控 标准品D=阳性质控 内含腮腺炎病毒的IgM抗体，PBS（磷酸缓冲液），稳定剂。 1×14ml 酶标IgM 红色，待用。内含过氧酶标记的抗人IgM，蛋白缓冲液，稳定剂。 1×12×8 包被板 可拆，包被有特异性抗原。 1×14ml TMB底物液 含TMB 1×14ml TMB终止液 0.5M的H2SO4 1×60ml 稀释液 含PBS缓冲液，＜0.1%NaN3 1×60ml 浓缩洗涤液 浓缩型（10×），含PBS缓冲液，吐温20 2× 粘性金属板 用于在温育时遮盖包被板 1× 塑料袋 用于储存不用的板条 5、实验所需材料但试剂盒不提供 RF吸附剂 移液器，体积：5；50；100；500 μL 校准仪 样品稀释用试管（1ml） 带试剂储器8道移液器 洗涤瓶，自动或半自动洗板机 能在450nm处读数的酶标仪 双蒸水或去离子水 吸水纸，取样吸头和计时器 6、实验前的准备说明 6.1成分准备 稀释/溶解 成分 稀释液 比例 备注 贮存 稳定性 60ml 洗涤液 加600ml 双蒸水 1：10 加热至37°C以溶解结晶，充分混合 2-8°C 8周 6.2样品稀释 样品 稀释 稀释液 比例 备注 血清/血浆 全部稀释 稀释缓冲液 1：101 例：5μL+500μL 样品中IgG浓度高于最高标准品的应当进一步稀释。 6.3用RF吸附剂处理： 注意 为了避免特异性IgG和类风湿因子的干扰，病人的血清应当用RF吸附剂处理(RE59059)。 标准品和质控品千万不要用RF吸附剂处理。 1. 在400μL按1：101的比例稀释的样品中加入20μL RF吸附剂。充分混合。 2. 室温（18-25℃）下温育≥1min（﹤15min） 为了避免吸附特异性抗体，应当避免温育时间﹥15min。 预处理的样品可能会是浑浊的。 7、实验步骤： 加100μL标准品和已稀释样本于相应反应孔中，在定性检测中只使用标准品B。 封板后室温（18℃-25℃）温育60分钟。 移去粘性金属板，弃去孔中液体。用300μL洗涤液洗板3次，在吸水纸上拍干。 在每一微孔中加入100μL酶联物。 封板后室温（18℃-25℃）温育30分钟。 移去粘性金属板，弃去孔中液体。用300μL洗涤液洗板3次，在吸水纸上拍干。加底物液和终止液时，如果有条件的话，可使用8孔微量移液器。确保底物液和终止液都是相同的时间间隔加入。使用确切容积并避免气泡产生。 每孔加TMB底物液100μL。 室温（18℃-25℃）避光温育20分钟。 在每一微孔中加入100μLTMB终止液以终止底物反应。轻轻摇动包被板以使试剂混合均匀。此时，颜色蓝色变成黄色。 加终止液后60分钟内在450nm处测OD值。 8、结果计算 在半对数坐标纸上或用自动生成的方法，以标准品的OD值为Y轴，浓度为X轴，绘制一标准曲线图。用立体图、4参数对数图或对数-对数图都可获得良好的实验结果。对于标准曲线图，用标准品的每一单值进行计算（样品结果明显异常的值必须