脑心肌炎病毒vp片段基因稳定性、原核表达及应用-毕业论文.docVIP

毕业论文（设计） 题 目 学 院 学 院 专 业 学生姓名 学 号 年级 级 指导教师 　 毕业教务处制表毕业 脑心肌炎病毒VP1片段基因稳定性、原核表达及应用研究-毕业论文 一、毕业论文说明 本团队专注于毕业论文写作与辅导服务，擅长案例分析、编程仿真、图表绘制、理论分析等，论文写作300起，具体价格信息联系 二、毕业论文范文参考如下 毕业论文摘要：脑心肌炎是由脑心肌炎病毒(Encephalomyocarditis virus,EMCV)引起猪及一些哺乳动物、乃至灵长类动物的脑炎、心肌炎或心肌周围炎为主要临床症状的一种人畜共患急性传染病。它具有重要的公共卫生学意义,近年来引起了国内外学者的重视。其中研究最热门的是VP1基因,因为其表达的蛋白处于脑心肌炎病毒粒子的最表面,其抗原性也是最强的,该蛋白可刺激机体产生具有中和活性的多克隆抗体,是形成病毒受体结合位点的主要成分,同时VP1的氨基酸序列与病毒的致病性密切相关。本研究以ATCC保藏的EMCV毒株在BHK-21细胞上进行稳定性培养,选取原毒(F0),F4,F8,F12,F16,F20提取核酸,扩增VP1片段,构建克隆载体后由上海生工完成测序并进行拼接。用DNAstar软件进行比对分析,结果显示各代次间VP1的碱基突变率为0.3%-1.6%,传代后各代次病毒VP1基因与F0同源性为98.4%-99.7%。氨基酸突变率为0.7%-1.7%,传代后各代次病毒VP1基因与F0同源性为98.3%-99.3%。突变率较低,符合2010年《中华人民共和国药典》的规定。说明EMCV在BHK-21细胞中连续培养VP1基因的遗传学特性稳定,可以应用于疫苗生产中的病毒接种及培养环节。设计引物,从EMCV原始毒株上扩增VP1片段,构建表达载体,通过优化最佳表达条件,实现VP1的可溶性表达,得到的目的产物大小为56kD,经Western Blotting分析,该蛋白可与EMCV抗血清发生特异性结合反应,证明它具有良好的生物学活性和特异性,可用于双抗原夹心Elisa方法的建立。将上述VP1基因重组蛋白进行包被,以灭活后EMCV病毒液标记辣根过氧化物酶,建立双抗原夹心检测抗体Elisa法,对其试剂批内、批间精密度以及热稳定性进行研究,结果显示,建立双抗原夹心检测抗体Elisa法的精密度小于10%,且稳定性良好,特异性高。用所建方法对来自甘肃某两个地区的1475份体检人血和1309份猪血进行检测,结果这两地区正常人群血清抗体阳性率分别为16.7%和17.0% ,正常猪血清3月龄以下抗体阳性率为56.4%,3月龄以上抗体阳性率为70.7%,符合文献报道。实验结果表明,EMCV能在BHK-21细胞上进行稳定传代,传代后VP1蛋白基因突变率较低,经优化表达条件实现VP1可溶性表达,得到的蛋白具有良好的生物学活性和特异性,用该蛋白包被,成功建立了稳定性、精密性和特异性良好双抗原夹心Elisa法,所建立的方法对甘肃省健康人群和猪血清样品进行检测。结果发现,在甘肃省存在人和猪的EMCV的感染,且在猪群中感染率较高。由于EMCV属人畜共患传染病病毒,可能会存在种属间交叉感染,在今后的研究和工作中应予以高度重视。 毕业论文思路： 项目资金来源 摘要 Abstract 缩略词英文对照表 第一部分：文献综述 1 EMCV 的分子生物学特征 1.1 病毒基因组结构 1.1.1 病毒的结构蛋白及功能 1.1.2 病毒的非结构蛋白及其功能 1.2 病毒蛋白的裂解 2 EMCV 的理化特性 3 EMCV 的致病性 4 EMCV 感染的临床症状及病理变化 5 EMC 的流行情况及特点 6 EMC 的诊断 7 EMC 的防治 8 本论文研究目的与意义 第二部分：实验研究 第一章：EMCV 连续培养VP1 基因稳定性 1 材料及仪器设备 1.1 主要材料 1.2 主要试剂 1.3 主要仪器设备 1.4 主要溶液及培养基 2 实验步骤及方法 2.1 EMCV 在细胞上的适应性培养及连续传代 2.1.1 病毒复融 2.1.2 适应性培养 2.1.2.1 毒液的稀释 2.1.2.2 细胞处理 2.1.2.3 细胞接毒 2