ELISA法检测水产品氯霉素的残留量 .docVIP

毕 业 论 文（设计） 题 目ELISA法检测水产品中氯霉素的残留量 指导老师 专业班级 生物技术及应用0701 姓 名 学 号 2010年5月30日 摘 要 采用酶联免疫吸附试验法对4个水产样品氯霉素的残留量进行检测，判断其是否符合国标限量要求，以便为其进入市场提供监测依据。研究主要利用溶剂萃取技术对样品进行预处理，再利用酶联免疫吸附试验法(ELISA法)测定样品中残留氯霉素含量；检测结果表明，4个水产样品（花莲鲈鱼甲鱼南美白对虾）0.011、0.011、0.014、0.009 ug/kg，均低于国标限量值0.3ug/kg，符合动物源性食品出口欧盟和美国等国家的要求，可以进入市场。 关键词： 录……………………………………………………………………………………1 1 材料…………………………………………………………………………2 1.1 实验样品…………………………………………………………………………2 1.2 实验试剂…………………………………………………………………………1.3 试验仪器…………………………………………………………………………2 方法…………………………………………………………………………………3 2.1 样品预处理………………………………………………………………………2.2 酶联免疫检测……………………………………………………………………3 3 结果与分析…………………………………………………………………………4 3.1 标准曲线的制作…………………………………………………………………4 3.2 样品中氯霉素浓度测定…………………………………………………………5 3.3 加标回收率实验…………………………………………………………………6 4 总结与讨论…………………………………………………………………………7 参考文献………………………………………………………………………………8 引言联免疫吸附试验（以下简称ELISA），是酶免疫测定技术中应用最广的技术。自从EngvaLL和PerLman（1971）首次报道建立酶联免疫吸附试验（Enzyme-Linked Lmmunos orbentAssays,ELISA）以来，由于ELISA具有快速、敏感、易于标准化等优点，使其得到迅速的发展和广泛的应用。基本方法是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体（聚苯乙烯微量反应板）表面，使酶标记的抗原抗体在固相表面进行反应，用洗涤法将液相中的游离成分洗除。 ELISA方法的基本原理是酶分子与抗体或抗原分子共价结合，此种结合不会改变抗体的免疫学特性，也不影响酶的生物学活性。此种酶标记抗体可与吸附在固相载体上的抗原或抗体发生特异性结合。滴加底物溶液后，底物可在酶作用下使其所含的供氢体由无色的还原型变成有色的氧化型，出现颜色反应。因此，可通过底物的颜色反应来判定有无相应的免疫反应，颜色反应的深浅与标本中相应抗体或抗原的量呈正比。此种显色反应可通过酶联免疫检测仪（酶标仪）进行定量测定，这样就将酶化学反应的敏感性和抗原抗体反应的特异性结合起来，使ELISA方法成为一种既特异又敏感的检测方法。 根据ELISA所用的固相载体ELISA方法可分为三大类型：一是采用聚苯乙烯微量板为载体的ELISA，即我们通常所指的ELISA（微量板ELISA）；另一类是用硝酸纤维素膜为载体的ELISA，称为斑点ELISA（Dot-ELISA）；再一类是采用疏水性聚脂布作为载体的ELISA，称为布ELISA（C-ELISA）。在微量板ELISA中，又根据其性质的不同分为间接ELISA、双抗夹心ELISA、双夹心ELISA、竞争ELISA、阻断ELISA及抗体捕捉ELISA。 本次试验所要用到的是竞争性酶联免疫吸附试验（即竞争ELISA）ELISA测定的基础是竟争性酶联免疫抗原抗体反应，所有的免疫反应都在微孔中进行。当加入氯霉素酶标记物、标准或样液、抗体(兔IgG即兔抗氯霉素的抗体)后存在于样品或标准溶液中的游离氯霉素和酶标记氯霉素相互竞争与氯霉素特异性抗体的结合位点。由于微孔板中已包被有羊抗兔IgG的抗体所以氯霉素抗体与羊抗体相结合而被固相化在微孔中与氯霉素抗体结合的氯霉素酶标记物也因此被保留在,氯霉素酶标记物中的酶通过与底物反应，将无色的底物催化为蓝色的产物,加入反应终止液可使颜色由蓝变黄。用酶联免疫检测仪（酶标仪）在450nm处测量吸光度值，样品中氯霉素浓度与吸光度值成反比。 氯霉素(ChLoramphenicoL,简称CAP)，又称氯胺苯醇,是一种广谱抗生素[5]。由于其价廉及优