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　　化学消毒剂作用机理研究进展(1)6600字 摘要: 细胞壁的屏障作用是微生物降低对消毒剂敏感性的普遍机制。消毒剂对细胞膜的作用导致膜的通透性增加, 胞内物质泄漏, 呼吸链被破坏等。一些消毒剂能直接改变、破坏蛋白质和核酸的结构和功能, 但核酸和蛋白质的合成过程可能比结构本身对消毒剂更加敏感。流式细胞仪、单细胞凝胶电泳等新技术的应用将使人们能够更深刻地了解消毒剂的作用机理。关键词: 化学消毒剂, 作用机理, 细胞膜, 蛋白质, 核酸 zuoi[ 6 ]的研究显示, 洗必泰作用后链球菌突变体NC IB11723的糖酵解速率下降, 但这种下降主要是由于酵解中间产物的泄漏引起的。呼吸被抑制的重要标志是ATP合成量的减少。原核生物的呼吸链位于细胞膜上,消毒剂与膜的接触可破坏呼吸链, 导致ATP合成下降或受阻, 造成细胞死亡。Dinning等[ 7 ]用虫荧光素- 虫荧光素酶生物发光法测定并发现亚抑制浓度的羟基吡啶硫酮就能使胞内ATP水平大幅度下降。刘雪林等发现二氧化氯作用30 s后大肠杆菌的ATP酶活性下降显著。s[ 8 ]发现3 - 氯- 4, 4 - 二甲基- 2 - 噁唑烷酮和1, 3 - 二氯- 4, 4, 5, 5- 四甲基- 2 - 咪唑烷酮对金黄色葡萄球菌的K+泄漏和H+通透性增加作用不大, 但细胞的耗氧量减少, 可见抑制呼吸酶是这两种抑菌剂作用的第一步, 并最终会导致微生物失活。目前对呼吸抑制作用的证据主要是氧消耗(或吸收) 的减少或ATP合成水平下降等间接指标。但消毒剂具体作用在呼吸链上的哪一个环节或哪一种酶还难以确定, 也许是这些酶难以分离纯化阻碍了这方面的研究。真核生物的呼吸链位于线粒体内膜上,其呼吸链与消毒剂接触的难度比原核生物大, 因此消毒剂对它的能量代谢的作用机制可能更复杂些。 脂肪酸含量变化也被用来分析消毒剂的作用机理。Triclosan是一种膜作用剂, 但研究显示其对于金黄色葡萄球菌和大肠杆菌及其它细菌的生长抑制作用主要是因为依赖于NADH的脂酰- ACP转移还原酶被抑制, 造成脂肪酸合成被停止。刘雪林发现大肠杆菌被二氧化氯杀灭与脂质被氧化有关。另外, 碘类消毒剂、过氧乙酸等也对细胞膜上的脂肪酸发生作用。 论文 用同位素标记法研究消毒剂对蛋白质及核酸合成的影响也是一个重要的研究方法。Viktor[ 9 ]用14 C - Adenine和14 C - Leucine作为合成前体测定了16种季铵盐类消毒剂对阴沟肠杆菌( Enterobacter cloacae) 的蛋白质及DNA合成的影响, 发现有15种消毒剂的DNA合成的IC50小于蛋白质合成的IC50 , 其中7种消毒剂主要作用于DNA的合成。似乎阴沟肠杆菌DNA合成比蛋白质合成更容易受季铵盐类消毒剂的影响。也有人用同位素掺入法研究了二氧化氯对蛋白质合成的影响。病毒的外壳蛋白( cap sid p rotEin) 一直是研究病毒消杀机理的一个热点。消毒剂与病毒外壳的作用方式与强度因消毒剂和病毒的种类而异。总体而言, 有包膜病毒比裸病毒对消毒剂更敏感。多数化学消毒剂对有包膜病毒几乎都有效, 但季铵盐类、洗必泰、戊二醛对裸病毒的杀灭效果都不甚理想。有研究显示, 病毒基因组不是戊二醛作用的理想位点, 戊二醛主要与病毒外壳上的氨基酸发生交联作用, 特别是与赖氨酸上的ε-氨基发生交联。Martine[ 101证明了戊二醛对肠病毒的毒力与病毒VP1外壳蛋白上的赖氨酸残基的排列顺序有关, 而与其总数目没有明显相关性。3　消毒剂对核酸的作用核酸位于细胞的内部, 真核生物的核酸还有核膜包被, 因此核酸可能是消毒剂最后到达的位点之一。芬顿反应( Fenton reaction) 是一个能产生羟自由基的反应体系( Fe2 + +H2O2 → Fe3 + +OH- + ·OH ) , 常被应用于羟自由基对DNA损伤的胞外研究。胞外的DNA损伤试验为研究胞内的DNA损伤提供了有益的信息[ 11 ] 。质粒pSV2neo在芬顿反应处理后, 透射电镜显示其损伤包括形成缺口环状分子、线状分子、单链噜噗( loop) 结构和质粒聚合物等[ 12 ] 。戊二醛似乎对枯草芽孢杆菌芽孢的DNA没有损伤作用。陈春田发现二氧化氯可导致大肠杆菌DNA漏出, 但漏出率与杀灭率不成比例。 含氯消毒剂对细菌DNA毒性包括形成含氯的核苷酸碱基衍生物, 216mg/L的次氯酸作用5min能彻底抑制大肠杆菌的生长, 对DNA合成的抑制率为96% , 而对蛋白质合成的抑制率仅为10%～50% , 因此推断DNA合成是对该消毒剂的更为敏感的环节。含氯消毒剂具有杀病毒活性, Olivieri发现氯( chlorine) 对f2噬菌体裸露RNA及完整衣壳内的RNA有同等的损伤效果, 但其外壳蛋白仍然能够进入