抗生素类药物的分析课件_2.ppt

* 由于结构不同的高分子杂质通常具有相似的生物学特性（过敏性），因此在药品质量控制中一般只需控制药品中高分子杂质的总量而不必控制不同结构的杂质。 因此，根据样品分子量差异进行分离的凝胶色谱法则具有明显的优势。 * 根据β-内酰胺类抗生素和其高分子杂质的分子量，比较了数种凝胶介质，最后选用Sephadex G-10 作为β-内酰胺类抗生素高分子杂质分离色谱系统的凝胶介质，Sephadex G-10排阻分子量在1000道尔顿左右。 * β-内酰胺类抗生素的高分子杂质具有高度的不均一性和不确定性，故无法制备对照品，不能采用对照品法定量。中国药品生物制品检定所金少鸿教授等，根据β-内酰胺类抗生素在不同离子强度的介质中具有不同表现状态的性质，首次建立了凝胶色谱自身对照外标法定量测定β-内酰胺类抗生素中的聚合物。此方法已经载入《中国药典》2000年版和2005年版，用于国产β-内酰胺类抗生素的质量控制，并已被国内外β-内酰胺类抗生素生产厂家广泛使用。 ? 实验证明，在以水，0.01%SDS或0.5%葡萄糖溶液作为流动相时，β-内酰胺类抗生素可缔合形成表观分子量较大的缔合物，该缔合物在Sephadex G 10 凝胶色谱系统中的色谱行为与高分子杂质一样，表现为单一的色谱峰。利用这一特点，在Sephadex G 10 凝胶色谱系统中制定了新的定量方法-----自身对照外标法。 ? * 凝胶或高分子微球等填充剂用于分子排阻色谱 * 凝胶或高分子微球等填充剂用于分子排阻色谱 * 降解产物青霉烯酸 * 与维生素C的类糖反应进行联系。维生素C形成的糠醛与吡咯加热至50℃后产生蓝色 蛋白质胍基的反应，氨基酸中只有精氨酸发生坂口反应。在碱性下胍基能被次溴酸钠氧化 * 亚氨基（＝NH） * * 3. TLC法 薄层板 硅藻土 pH7.0 （黏合剂 EDTA+甘油） 稳定 流动相 乙酸乙酯-三氯甲烷-丙酮 （2:2:1）（含EDTA） 克服痕量金属离 子引起拖尾现象 * 例 盐酸土霉素 Ch.P（2005） 【鉴别】（2）取本品与土霉素、盐酸金霉素及盐酸 四环素对照品，分别加甲醇制成每1ml中含1mg的溶液；另取土霉素、盐酸金霉素及盐酸四环素对照品，加甲醇制成每1ml中含上述三种对照品各1mg的混合溶液，照薄层色谱法（附录Ⅴ B）试验，吸取上述五种溶液各1?l，分别点于同一薄层板上，取4%乙二胺四醋酸二钠溶液（pH7.0）5ml，加至乙酸乙酯-三氯甲烷-丙酮（2:2:1）200ml中为展开剂，展开后，晾干，用氨蒸气熏后，置紫外光灯（365nm）下检视，混合溶液应显示三个明显斑点，供试品溶液所显斑点的荧光强度及位置应与相应的对照品溶液的斑点相同。 * 4. HPLC法 鉴别、检查、含量测定 例 盐酸四环素 Ch.P（2005） 【鉴别】（2）在含量测定项下记录的色 谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对 照品溶液主峰的保留时间一致。 盐酸土霉素，盐酸金霉素，盐酸多西环素， 盐酸美他环素 * 5. 比旋度 手性C 例 盐酸四霉素 Ch.P（2005） 【性状】比旋度 取本品，精密称定， 加0.01mol/L盐酸溶液溶解并定量稀释成每1 ml中含10mg的溶液，依法测定（附录Ⅵ E） ，比旋度为-240°~-258°。 * 6. 光谱法 UV、FR、IR * 例 盐酸美他环素 Ch.P（2005） 【鉴别】（1）取本品，加1mol/L盐酸溶液溶 液的甲醇溶液（1→100）制成每1ml中含10mg的 溶液，照紫外-可见分光光度法（附录Ⅳ A）测 定，在345nm的波长处有最大吸收，其吸光度为 0.31~0.33。 例 盐酸四环素 Ch.P（2005） 【鉴别】（3）本品的的红外光吸收图谱应与 对照的图谱（光谱集332图）一致。 * 7. Cl-反应 例 盐酸四环素 Ch.P（2005） 【鉴别】（4）本品的水溶液显氯化物的 鉴别反应（附录Ⅲ）。 盐酸盐 例 盐酸土霉素 Ch.P（2005） 【鉴别】（5）本品的水溶液显氯化物的 鉴别反应（附录Ⅲ）。 * 三、特殊杂质