激动剂抑制高脂饲养小鼠动脉粥样硬化病变形成及其机制研究课件.pptVIP

LXR激动剂抑制高脂饲养小鼠动脉粥样硬化病变形成及其机制研究 第三军医大学西南医院心内科 胡厚源 颜 伟 张同欣 研究背景 肝X受体 (liver X receptors ，LXR)能调节多种参与胆固醇代谢的关键酶，促进胆固醇逆转运，加速体内多余胆固醇的清除，从而维持机体胆固醇的平衡,又有体内“胆固醇感受器”之称。 LXR为配体依赖性核受体，可分为LXRα、LXRβ两种亚型。在与相应的配体/激动剂结合后被活化，并与维甲酸X受体(retinoid X receptors, RXR)结合形成LXR/RXR异源性二聚体，调节靶基因表达，发挥其生物学效应。 LXR的激动剂包括生物体内产生的氧化甾醇、化学合成的氧化甾醇及其类似物。国外已合成的LXR的激动剂主要有T-0901317和hypocholamide。 第三军医大学药学教研室，采用高立体选择性化学合成法，以猪去氧胆酸为原料，高效合成了LXR激动剂MHEC (methyl 3β-hydroxy-5α，6α-epoxycholante, 3β-羟基-5α，6α环氧胆酸甲酯) 。 LXR激动剂与胆固醇逆转运 主要技术路线 结 果 一、血脂检测结果 ApoE-/-小鼠各组血脂测定结果（x±s，n=6） 二、病理和形态学分析 方　　法 LXR激动剂对RAW 264.7细胞TNF-α、IL-6产生和分泌的影响 讨　　论 ABCA1是LXR的靶基因——LXR激动剂可提高ABCA1基因启动子活性，使其表达上调。有研究发现脂质负荷巨噬细胞内生理性LXR激动剂合成增加，通过激活LXR可上调ABCA1基因表达，促进胆固醇外流及逆转运。 越来越多的研究结果证实，以活化的T淋巴细胞为代表的特异性免疫反应和以单核细胞为代表的非特异性免疫反应造成动脉壁持续性免疫病理损伤是促进动脉粥样硬化发生、发展的重要机制。 TNF-α是一种由单核-巨噬细胞产生的重要的细胞因子，可引起T细胞浸润，局部炎症反应，导致内皮细胞、平滑肌细胞凋亡；还被认为具有促血管生成作用。 IL-6是另一种由单核－巨噬细胞产生的细胞因子。其生物学性质与TNF有许多相似之处，并且可增强TNF的效应。 本部分实验发现，正常培养的小鼠巨噬细胞TNF-α及IL-6的表达水平较低。 ox-LDL可促进RAW264.7细胞TNF-α、IL-6的产生和分泌，而LXR激动剂MHEC或T-1317均可显著减轻ox-LDL的这种作用。从而可能减少血管内皮下炎细胞的浸润，抑制淋巴因子等炎症介质的释放，减轻动脉粥样硬化斑块局部的炎症反应。 LXR激动剂这种抗炎作用的机理目前还不清楚。 谢 谢 * ABCA1、iNOS、eNOS、PCNA、PAI-1 高脂饲养＋ LXR激动剂干预 取材、固定、制备标本 计算动脉粥样硬化病变面积 RAW264.7细胞 LXR激动剂干预 HE、苏丹IV、油红O染色 ABCA1、 TNF-α、IL-6 ApoE-/-小鼠 检测血脂 1. 实验动物： 雄性ApoE基因敲除小鼠18只，12周龄，体重17－ 20g，购自北京大学医学部实验动物中心。 高脂饲料：在普通颗粒饲料中添加1.25％胆固醇、15％脂肪。 随机分为三组（药物 10mg·kg-1·d-1 ）： ① 高脂对照组：高脂饲料加无水酒精溶液灌胃6周； ② MHEC组：高脂饲料加MHEC溶液灌胃6周； ③ T-0901317组：高脂饲料加T-0901317溶液灌胃6周。 2. RAW264.7细胞株——小鼠巨噬细胞样细胞株 。 材料和方法 3.62±1.09# 7.66±1.20 1.13±0.47 32.53±5.64 23.38±1.41 MHEC 2.33±0.96* 7.70±1.63 3.19±2.6# 45.24±10.98# 23.52±1.62 T-0901317 1.80±0.57 5.89±1.15 1.17±0.41 30.7±3.31 23.63±1.06 高脂对照 HDL-C （mmol/L） LDL-C （mmol/L） TG （mmol/L） TC （mmol/L） Bodyweight （g） *P＜0.05, #P＜0.01 , compared with control group MHEC组 T-0901317 组 对照组 图1 ApoE-/-小鼠 主动脉根部HE染色 图2 小鼠主动脉内膜面苏丹IV 染色结果 C57BL/6J mice T-0901317组 MHEC组 对 照 组 ApoE -/- mice 三、LXR激动剂对血管壁中ABCA1表达